產(chǎn)品名稱 | 原代人宮頸癌成纖維細胞 | 英文名稱 | Human Cervical Cancer Fibroblast Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號 | GOY-01X1296 |
組織來源 | 宮頸癌組織 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：
人宮頸癌組織源成纖維分離自患有宮頸癌病人的宮頸癌組織；宮頸癌也稱子宮頸癌，指發(fā)生在子宮陰道部及宮頸管的惡性腫瘤，是女性常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率位于女性腫瘤的第二位。宮頸癌可向鄰近組織和器官直接蔓延，向下至陰道穹窿及陰道壁，向上可侵犯子宮體，向兩側可侵犯盆腔組織，向前可侵犯膀胱，向后可侵犯直腸。也可通過淋巴管轉移至宮頸旁、髂內(nèi)、髂外、腹股溝淋巴結，晚期甚至可轉移到鎖骨上及全身其他淋巴結。血行轉移比較少見，常見的轉移部位是肺、肝及骨。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）構成，包括纖維細胞，免疫細胞，內(nèi)皮細胞，間充質干細胞等，腫瘤細胞通過調控這些間質細胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉移的條件，從而使得腫瘤得到進展。越來越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中，研究最多也是最主要的間質細胞是腫瘤相關成纖維細胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來。宮頸癌組織源成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的宮頸癌組織源成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
公司實驗室分離的人宮頸癌成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人宮頸癌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）用適當量的凍存液（基礎培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉移至適當面積大小的培養(yǎng)皿中；
3）放置于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
人腎母細胞瘤細胞 | 人胚腎細胞（ampho轉染） |
人膀胱移行細胞乳頭瘤細胞 | 禽腎炎病毒2型PCR檢測試劑盒 |
pCDNA3.1-his-TNFRSF4 | 禽腎炎病毒通用PCR檢測試劑盒 |
TNFRSF4人源基因 | 禽副粘病毒通用PCR檢測試劑盒 |
人小細胞肺癌細胞 | 禽正呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒 |
人子宮頸表皮癌細胞 | 禽副粘病毒1型PCR檢測試劑盒 |
人髓樣甲狀腺癌細胞 | 禽副粘病毒2型PCR檢測試劑盒 |
人牙齦成纖維細胞 | 禽副粘病毒4型PCR檢測試劑盒 |
人星形膠質細胞 | 鳥類髓細胞瘤病毒PCR檢測試劑盒 |
CP70人卵巢癌細胞 | 禽類支原體通用PCR檢測試劑盒 |
人乳頭狀肺腺癌細胞 | 禽偏肺病毒PCR檢測試劑盒 |
小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞 | 禽白血病病毒通用PCR檢測試劑盒 |
小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 | 原代人宮頸癌成纖維細胞禽白血病病毒亞群PCR檢測試劑盒 |
人牙周膜成纖維細胞 | 禽傳染性支氣管炎病毒型PCR檢測試劑盒 |
新疆出血熱病毒檢測試劑盒 | 狷羚皰疹病毒1型PCR檢測試劑盒 |
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，
2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預冷的PBS中，盡可能的除去結締組織等，
3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細胞培養(yǎng)箱中，
4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會飄起來，
5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細胞重新鋪瓶。
