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初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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細(xì)胞凍存及復(fù)蘇操作步驟2023/9/11
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇操作步驟：一、凍存1、消化細(xì)胞，將細(xì)胞懸液收集至離心管中。2、1000rpm離心10分鐘，棄上清液。3、沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，調(diào)整至5×106/ml左右。4、將懸液分至凍存管中，每...
PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)注釋2023/9/8
循環(huán)參數(shù):1.預(yù)變性模板DNAwan全變性與PCR酶的wan全激活對(duì)PCR能否成功至關(guān)重要，建議加熱時(shí)間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時(shí)間為兩分鐘。2.變性步驟循環(huán)中一般95℃，30秒足以使...
單克隆抗體的性質(zhì)鑒定方法2023/8/28
當(dāng)獲得多個(gè)雜交瘤細(xì)胞株時(shí)，要了解哪一株是zui適用的，則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有：（一）Ig類型測(cè)定通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行測(cè)定，確定其Ig類...
胎牛血清質(zhì)控外觀判定要素2023/8/21
拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來說，外觀的判斷尤為重要。1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上...
大鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞操作要點(diǎn)2023/8/17
大鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞操作要點(diǎn)：1、將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。2、將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37...
熒光定量PCR擴(kuò)增曲線四個(gè)時(shí)期2023/8/7
擴(kuò)增曲線是描述PCR動(dòng)態(tài)進(jìn)程的曲線，以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，以反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)。理論上PCR過程中反應(yīng)產(chǎn)物是以指數(shù)增長的，但隨著PCR循環(huán)數(shù)的增加，DNA聚合酶失活、dNTP和引物枯竭、反...
抗原幾個(gè)基本條件2023/8/1
構(gòu)成抗原的基本性質(zhì)，一般須具備如下幾個(gè)基本條件：異源物質(zhì)、有一定的分子量、有較復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu)、特異性。1、異源物質(zhì)：在正常情況下，只有異體物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)才可能具有免疫原性。一般說，這種異體物質(zhì)必須是動(dòng)物...
ELISA樣品處理和移液技術(shù)注意事項(xiàng)2023/7/17
試劑和樣品處理不當(dāng)或儲(chǔ)存不正確會(huì)影響下游分析，因?yàn)椴煌木彌_劑和試劑會(huì)有不同的儲(chǔ)存要求。例如，有些必須儲(chǔ)存在冰箱里，有些在室溫下，有些用感光罩（如鋁箔）。如果有計(jì)劃在未來的實(shí)驗(yàn)中使用相同的樣品，那么應(yīng)...
探究酶的特性實(shí)驗(yàn)材料及選擇鑒定的試劑2023/7/10
酶的特性包括酶的高效性、酶的專一性、作用條件較溫和（溫度和PH對(duì)酶的活性有影響）。常見的實(shí)驗(yàn)材料及選擇鑒定的試劑：1、H2O2：過氧化氫在FeCl3和過氧化氫酶的催化及高溫條件下分解，可通過觀察氣泡的...
小鼠骨形成蛋白（BMPs）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)2023/6/26
小鼠骨形成蛋白（BMPs）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3、...
大鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)基本條件2023/6/12
大鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)基本條件：1、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的小鼠源細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)...
貼壁細(xì)胞傳代參考2023/6/5
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-...
血清購買注意點(diǎn)2023/5/29
血清的質(zhì)量，種類及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長，而不同批次的血清支持細(xì)胞生長的能力也不同，尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長，某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長的物質(zhì)。因此，在購買大量血清之前，必須對(duì)血清...
ELISA試驗(yàn)包被各條件選擇介紹2023/5/23
1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被，對(duì)于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)...
PCR引物設(shè)計(jì)和選擇遵循原則2023/5/15
PCR反應(yīng)產(chǎn)物的特異性由一對(duì)上下游引物所決定。引物的好壞往往是PCR成敗的關(guān)鍵。引物設(shè)計(jì)和選擇目的DNA序列區(qū)域時(shí)可遵循下列原則：1、引物長度約為16-30bp，太短會(huì)降低退火溫度影響引物與模板配對(duì)，...
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