艾美捷科技有限公司
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閱讀：1458發布時間：2013-9-22
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗體和抗原的反應畢竟不象1+1那么明確，而用這種不確定的試劑來測定同樣知之甚少的表達產物，確實是有一定的不確定性的。所以，嚴謹的Western Blot實驗設計中要求有良好的參照體系，對實驗結果分析是非常有用的。
我們知道，要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達量的相對多少，前提條件是等量的細胞上樣，才有比較的基礎。特別表達量不高時，上樣量的差別就很可能影響結果的分析。艾美捷向您推薦使用內參抗體來檢測您的實驗系統，或者校準您的實驗結果。內參即是內部參照（Internal Control），對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白（Housekeeping Proteins），它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。在Western Blotting中使用內參其實就是在WB過程中的另外用內參對應的抗體檢測內參，這樣在檢測目的產物的同時可以檢測內參的表達，由于內參在各組織和細胞中的表達相對恒定，借助檢測每個樣品內參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結果才更為可信。此外使用內參可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否*、整個Western Blot顯色或者發光體系是否正常。
實驗結果分析其實很簡單：如果樣品蛋白量有限，只夠進行一次電泳轉膜實驗時，分別檢測樣品的內參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內參含量，得到的數值即為內參校正后的各樣品中目的蛋白相對含量，再用此數值進行樣品間的比較和分析，得到目的蛋白含量在不同樣品間的實際變化結果。如果樣品量充分，可以先檢測內參，觀測樣品間內參顯色條帶是否一致，根據差異大小調整各樣品的上樣量重新進行Western Blotting實驗，至內參量一致為止；若內參一致，即可進行不同樣品間目的蛋白表達變化分析。這樣雖然麻煩一點，但是可以保證結果更有說服力，更可信。畢竟我們的實驗是一種嚴謹的工作。
常用的細胞總蛋白質內參有GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）和細胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin，這其中近的國外文獻報道中使用GAPDH內參的較多。對于一些植物的樣本，則需要特別的植物Actin蛋白作為內參；同樣的，如果提取的樣本是細胞核蛋白，那么PCNA或者組蛋白H3都是被經常使用的；而針對一些研究線粒體的客戶，那么Cox IV則被較多的文獻引用作為線粒體總蛋白的內部參考。美國Abbkine品牌提供非常完整的內參產品解決方案，艾美捷公司向您推薦進口Abbkine全系列內參抗體產品，相關產品如下：
| 內參抗體名稱 | 內參類型 | 觀察分子量 | 品牌 | 貨號 | 詳情 |
| Beta-Actin mAb （1C7） | 細胞總蛋白 | 42 kD | Abbkine | A01010 | 小鼠源單克隆 |
| Beta-Actin mAb （1C7） , HRP | 細胞總蛋白 | 42 kD | Abbkine | A01015 | 小鼠源單克隆,HRP偶聯 |
| GAPDH mAb （2B5） | 細胞總蛋白 | 36 kD | Abbkine | A01020 | 小鼠源單克隆 |
| GAPDH mAb （2B5） , HRP | 細胞總蛋白 | 36 kD | Abbkine | A01025 | 小鼠源單克隆,HRP偶聯 |
| Beta-Tubuline mAb （3G6） | 細胞總蛋白 | 55 kD | Abbkine | A01030 | 小鼠源單克隆 |
| Plant Actin mAb （3T3） | 植物細胞總蛋白 | 42 kD | Abbkine | A01050 | 小鼠源單克隆 |
| PCNA mAb （1D7） | 細胞核蛋白 | 28 kD | Abbkine | A01040 | 小鼠源單克隆 |
| COX IV mAb （14Y2） | 細胞線粒體總蛋白 | 16 kD | Abbkine | A01060 | 小鼠源單克隆 |
| Histone H3 mAb （2D10） | 細胞核蛋白 | 18 kD | Abbkine | A01070 | 小鼠源單克隆 |
美國Abbkine品牌是一家提供高性價比免疫學和細胞學科研產品及解決方案的品牌，艾美捷將其引入中國，作為其中國區域代理，將為客戶提供的常規免疫學試劑，如各種標簽抗體、內參抗體、常規一抗以及全系列二抗，抗體檢測底物以及相關試劑盒等。同時我們作為多家品牌的的中國代理或 區域代理，艾美捷能為您提供系列的實驗室解決方案。如果您對上述產品感興趣，請致電* 轉801/802/803 或者/4876到艾美捷科技有限公司垂詢相關的產品信息及完整實驗解決方案
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