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ELISA試劑盒標準操作方法您做對了么?

時間:2013/11/21閱讀:366
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ELISA酶聯免疫法是如今實驗室zui為常見的檢測方法,在做ELISA試劑盒實驗時我們的首要當然是確定實驗類型,然后就是樣本收集,樣本收集好了我們就可以開始進行實驗。但是關于ELISA試劑盒標準操作方法您是否做對了呢?跟隨上海勁馬一起來檢查一下您的實驗步驟是否規范吧。
試劑準備
在臨床實驗室,對試劑準備一般不太注意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準備zui為關鍵的是,在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,目前的ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。此外,當試劑盒以OPD為底物時,則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。
加血清樣本及反應試劑
在現在的ELISA試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關鍵點是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。試劑的加入在國產試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出現重復滴加或加在兩孔之間的現象,這樣就會在孔內的非包被區出現非特異吸附,從而引起非特異顯色。
溫育
溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。
按照以上ELISA試劑盒標準操作就能知道當您的實驗結果不正確時,問題出在哪個步驟。當然了,如果您的實驗步驟嚴謹,操作規范,那么實驗就會很成功。
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