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原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)有哪些實質區(qū)別分析

時間:2014/3/24閱讀:1646
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實驗中,我們常常把原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)的定義弄混,因此實驗不成功。據上海勁馬實驗設備公司實驗室提供原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)中有哪些實質性的區(qū)別分析:

原代培養(yǎng):即*次培養(yǎng),是指將培養(yǎng)物放置在體外生長環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng),中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程。
有幾方面含義:培養(yǎng)物一經接種到培養(yǎng)器皿(瓶)中就不在分割,任其生長繁殖;       原代培養(yǎng)中的“代”并非細胞的“代”數,因為培養(yǎng)過程中細胞經多次分裂已經產生多代子細胞;
原代培養(yǎng)過程中不分割培養(yǎng)物不等于不更換培養(yǎng)液,也不等于不更換培養(yǎng)器皿。正常 細胞培養(yǎng) 的世代數有限,只有癌細胞和發(fā)生轉化的細胞才能無限生長下去。所謂轉化即是指正常細胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細胞。目前世界上許多實驗室所廣泛傳用的HeLa細胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮頸癌 細胞培養(yǎng) 而成。此細胞系一直延用至今。  
原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不易傳下去了,細胞的生長就會出現停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細胞叫做細胞株。細胞株的遺傳物質沒有發(fā)生改變,在培養(yǎng)過程中其特征始終保持。當細胞株傳至50代以后又會出現“危機”,不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質發(fā)生了改變,并且?guī)в邪┳兊奶攸c,有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去,這種傳代細胞稱為細胞系。  原代培養(yǎng)是建立各種細胞系(株)必經的階段,其是否成功與組織污染與否、供體年齡、培養(yǎng)技術和方法、適宜培養(yǎng)基的選擇等多種因素有關。由于原代培養(yǎng)的細胞轉化性極小,對病毒敏感性好,因此適應制備疫苗等生物制品;但也存在有潛在外源因子、不能事先檢查標本、且受供體年齡健康狀況的影響而導致批間差異大等缺陷。
目前常用的原代 細胞培養(yǎng) 有雞胚成纖維細胞及豬腎、猴腎、地鼠腎等原代細胞。
原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種、加培養(yǎng)液、置培養(yǎng)條件下培養(yǎng)等步驟,在所有的操作過程中,都必須保持培養(yǎng)物及生長環(huán)境的無菌。  
多數情況下,分散的細胞若屬于貼壁依賴型細胞,就能黏附、鋪展于培養(yǎng)器皿和載體表面生長而形成細胞單層,這種培養(yǎng)方式稱為單層 細胞培養(yǎng) (monolayer culture),又叫貼壁培養(yǎng)(adherent culture)。少數情況下,培養(yǎng)的細胞沒有貼壁依賴性,可通過專門設備使細胞始終處于懸狀態(tài)而在體外生長,這種形式稱為懸浮培養(yǎng)(suspension culture)。如何讓接種的細胞盡快貼壁,是決定培養(yǎng)成功的關鍵步驟:
取決于適當的生長基質表面;
可降低接種后培養(yǎng)液對細胞的浮力,如先少補加少量培養(yǎng)液,待細胞貼壁后再補足營養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);
注意適當的細胞接種密度,一般105個/ml左右。
傳代培養(yǎng):當原代培養(yǎng)成功以后,隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂,一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。此時就需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內,再進行培養(yǎng)。這個過程就稱為傳代(passage)或者再培養(yǎng)(subculture)。對單層培養(yǎng)而言,80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。  體外培養(yǎng)技術中所謂的傳“代”概念并不等于細胞生物學中“親代細胞”與“子代細胞”中“代”的概念。傳代培養(yǎng)的實質就是分割后再一次培養(yǎng),可以相對地衡量培養(yǎng)物的培養(yǎng)年齡

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