進口培養(yǎng)基: 顯色培養(yǎng)基大腸桿菌O157培養(yǎng)基細菌總數(shù)培養(yǎng)基 *培養(yǎng)基沙門氏菌志賀氏菌培養(yǎng)基弧菌檢驗培養(yǎng)基酵母霉菌青霉曲霉培養(yǎng)基其它培養(yǎng)基李斯特氏菌檢驗培養(yǎng)基藥品、生物制品檢驗培養(yǎng)基臨床檢驗培養(yǎng)基其它菌檢測培養(yǎng)基

抗體: 一抗二抗

食品檢測試劑盒: 進口檢測試劑盒進口檢測試紙條進口PCR檢測試劑盒 ELISA快速檢測試劑盒食品與農(nóng)產(chǎn)品安全速測試劑盒其他檢測試劑盒

放免試劑盒: 進口甲狀腺進口腫瘤進口糖尿病進口心血管進口性腺進口細胞因子其它試劑盒進口酶聯(lián)免疫試劑盒

免疫化學(xué)產(chǎn)品: 免疫球蛋白抗原純化抗體熒光素標(biāo)記抗體酶標(biāo)記抗體酶標(biāo)親合素及*化抗體免疫血清

其它方法測試盒: 速率法測試盒終點法測試盒比色法測試盒染液測試盒其他測試盒

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大鼠核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）ELISA試劑盒使用說明書

時間：2011/3/8閱讀：815

大鼠核因子kb受體活化因子配體ELISA試劑盒使用說明書

檢測范圍： 96T

25 pmol/L - 800 pmol/L

使用目的：

大鼠核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）ELISA試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）含量。

實驗原理

大鼠核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）水平。用純化的大鼠核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入核因子kb受體活化因子配體（ RANKL），再與HRP標(biāo)記的核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）濃度。

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標(biāo)試劑	6ml×1瓶	8	標(biāo)準(zhǔn)品（1600 pmol/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	9	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800 pmol/L	5號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400 pmol/L	4號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 pmol/L	3號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pmol/L	2號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 pmol/L	1號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1．大鼠核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）ELISA試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

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大鼠核因子kb受體活化因子配體（ RANKL）ELISA試劑盒使用說明書

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