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大鼠骨鈣素ELISA試劑盒的操作方法

時間:2013/7/23閱讀:473
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 大鼠骨鈣素ELISA試劑盒實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠骨鈣素(OC)水平。用純化的大鼠骨鈣素(OC)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入骨鈣素(OC),再與HRP標記的骨鈣素(OC)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠骨鈣素(OC)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠骨鈣素(OC)濃度。

 大鼠骨鈣素ELISA試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

3ml×1瓶

2

酶標試劑

3ml×1瓶

8

標準品(3200ng/L)

0.5ml×1瓶

3

酶標包被板

12孔×4條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

3ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

3ml×1瓶

11

封板膜

2張 

6

顯色劑B液

3ml×1/瓶

12

密封袋

1個

 大鼠骨鈣素ELISA試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

1600ng/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

800ng/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

400ng/L

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

200ng/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

100ng/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。



 

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