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其它方法測(cè)試盒

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2012-6-19閱讀:1136
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小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1TGF-β1)酶聯(lián)免疫分析
 
試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍:                                                           96T
3pg/ml-120pg/ml
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1TGF-β1)含量。實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1TGF-β1)水平。用純化的小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1TGF-β1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1TGF-β1),再與 HRP標(biāo)記的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1TGF-β1)抗體結(jié)合,形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1TGF-β1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度( OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1TGF-β1)濃度。
試劑盒組成

 

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1
7
終止液
6ml×1
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1
8
標(biāo)準(zhǔn)品(240pg/ml
0.5ml×1
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8
9
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ml×1
4
樣品稀釋液
6ml×1
10
說(shuō)明書(shū)
1
5
顯色劑 A
6ml×1
11
封板膜
2
6
顯色劑 B
6ml×1/
12
密封袋
1個(gè)

 

標(biāo)本要求
1           標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2           NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的( HRP)活性。
 
操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3
8.洗滌:操作同 5
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.測(cè)定:以空白空調(diào)零, 450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度( OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

120pg/ml
5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60pg/ml
4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30pg/ml
3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15pg/ml
2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5pg/ml
1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請(qǐng)避光保存。

7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) .

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期: 6個(gè)月

上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司是國(guó)內(nèi)外專業(yè)的ELISA試劑盒,進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒批發(fā)供應(yīng)商,主營(yíng)產(chǎn)品有:ELISA試劑盒,進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒批發(fā)等,上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司不僅具有國(guó)內(nèi)外的技術(shù)水平,更有良好的售后服務(wù)和的解決方案,洽談

操作程序總結(jié):
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的

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