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免疫組化一抗選擇要點和技巧

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 免疫組化一抗選擇要點和技巧

要點:一抗二抗都是一種可以特異結合別的東西的基團,而且一抗可以至少結合兩種其他基團(底物和二抗)。  

一抗盡量選擇單克隆抗體,還要注意其抗體來源(兔抗、鼠抗或者其他)要與二抗匹配。至于進口還是國產我覺得要看是什么組織,當然大多數情況下還是進口的好一點,也可以咨詢本公司業務員:電  話:/60520498

傳  真:86-21-64881400

   人:何

手  機:,,

抗體選擇首先考慮你需要染得的組織或細胞的來源,其次考慮在染色中需要不需要抗體雙標,明確了這一點后,就可以考慮你所需要的抗體的來源。在購買抗體的時候,如果你需要標記的蛋白是比較穩定、表達量比較高或者說是已經非常常用的蛋白,那么可以考慮國產的抗體,如中杉或者博士德。如果是比較新的蛋白,或者是不太清楚的蛋白表達量的,建議你用進口的抗體,如abcam、cell signalsata等,進口的抗體中sata的抗體比較便宜,但是用過后老是覺得抗體效價一般。

相關抗體反應規律:

(1)初次反應產生抗體:當抗原*次進入機體時,需經一定的潛伏期才能產生抗體,且抗體產生的量也不多,在體內維持的時間也較短。   

(2)再次反應產生抗體:當相同抗原第二次進入機體后,開始時,由于原有抗體中的一部分與再次進入的抗原結合,可使原有抗體量略為降低。隨后,抗體效價迅速大量增加,可比初次反應產生的多幾倍到幾十倍,在體內留存的時間亦較長。   

(3)回憶反應產生抗體:由抗原刺激機體產生的抗體,經過一定時間后可逐漸消失。此時若再次接觸抗原,可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機體的抗原與初次相同,則稱為特異性回憶反應;若與初次反應不同,則稱為非特異性回憶反應。非特異性回憶反應引起的抗體的上升是暫時性的,短時間內即很快下降。

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟

1、制備抗原。  

2、選擇實驗動物。

3、動物免疫。  

4、試取血進行測試,看看是否成功免疫。

5、如果成功免疫,殺死實驗動物,采集全部血清。

6、純化出抗體。  

7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。

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