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選擇雜交瘤細(xì)胞及抗體檢測

時間:2012/9/15閱讀:583
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1.HAT選擇雜交瘤細(xì)胞  脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)PEG處理后形成多種細(xì)胞的混合體,只有脾細(xì)胞與骨髓細(xì)胞形成的雜交瘤細(xì)胞才有意義。在HAT選擇培養(yǎng)液中培養(yǎng)時,由于骨髓瘤細(xì)胞缺乏胸苷激酶或次黃嘌呤*核糖轉(zhuǎn)移酶,故不能生長繁殖,而雜交瘤細(xì)胞含有上述兩種酶,在HAT選擇培養(yǎng)液中可以生長繁殖。用HAT選擇培養(yǎng)1~2d內(nèi)將有大量瘤細(xì)胞死亡,3—4d后瘤細(xì)胞消失,雜交細(xì)胞形成小集落。HAT選擇培養(yǎng)液維持7一tod后應(yīng)換用HT培養(yǎng)液,再維持2周,改用一般培養(yǎng)液。在上述選擇培養(yǎng)期間,雜交瘤細(xì)胞布滿孔底l/10面積時,即可開始檢測特異性抗體,篩選出需要的雜交瘤細(xì)胞系。在選擇培養(yǎng)期間,一般每2~3d更換一半的培養(yǎng)液。

 
    2.抗體的檢測  檢測抗體的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)、抗體的類型不同選擇不同的篩選方法,一般以快速、簡便、特異、敏感為原則。常用的方法有以下4種。
    (1)RIA可用于可溶性抗原、細(xì)胞McAb的檢測。
    (2)ELISA可用于可溶性抗原、細(xì)胞和病毒等McAb的檢測。
    (3)免疫熒光試驗(yàn)適合于細(xì)胞表面抗原的McAb的檢測。
    (4)其他如IHA、細(xì)胞毒性試驗(yàn)等。

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