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抗乙酰*受體(acetylcholinereceptor,AchR) 抗體檢測

時間:2012-8-27閱讀:301
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重癥肌無力(myastheniagravis,MG)是一種神經肌肉系統疾病,由于病人的自身抗體與神經肌肉連接處的乙酰*受體(acetylcholinereceptor,AchR)結合,對此受體起封閉和破壞作用。由于此種受體的大量破壞,從而發生神經的沖動不能傳導至肌肉,其主要臨床表現為肢體軟弱無力。抗AchR抗體主要為IgC型(以IgCl、IGC.2亞類為主,IgC.亞類次之),可檢測到IgM型。不同類型的MG病人血清抗AchR抗體具有不同性質。抗AchR抗體的檢測方法先使用的是放射免疫,以后,為避免使用核素,各種酶聯免疫法應運而生。這些檢測方法中都要應用。·銀環蛇毒素(a-bungarotoxin,a-BT):a-BT是從銀環蛇毒液中提取的一種肽類,分子量為8kD左右。它能高度選擇性與AchR結合,這種結合幾乎是不可逆的。如用ELISA法,可用ct-BT預先包被固相載體,然后利用其特異性吸附加入的AchR,再測定待測血清中的抗AchR抗體。ELISA法簡便易行,便于推廣,故將其介紹如下。

1.試劑 ①a-BT:可購得商品;②AchR:取人骨骼肌200—250g,用生理鹽水洗凈,加入濕重2倍量的緩沖液,高速勻漿90s后20 000Xg離心30rain。除去上清(血液、脂質),加入濕重2倍量的緩沖液,再次勻漿。向其中加入TritonX-100至終濃度為2%,4℃攪拌過夜。100 000Xg離心1h,上清即為AchR。也可購買商品;③HRP標記的抗人IgC。

2.操作步驟
(1)用包被液將ct-BT稀釋為適濃度(用方陣滴定法選出),包被聚苯乙烯反應板,每孔200pL(含ct-BT約為2.5pmol/L)。4℃過夜后用洗滌液洗3次,每次3min(以下同)。
(2)將AchR用稀釋液適當稀釋,加至包被孔中,每孔200btL(0.2pm01),37~C1h。同上洗滌。
(3)力[1X適當稀釋的待測血清,每孔200gL,37℃30min。同上洗滌。
(4)加入適工作濃度的HRP標記抗人IgC,37℃30rain。同上洗滌。
(5)加入底物溶液(OPD-H202)每孔200L,37℃ 30min,mol/LH2S04終止反應。

3.結果觀察 于酶標儀上測492nm吸光度。以陽性混合血清作為標準血清,制備標準曲線。待測血清中抗AchR抗體含量,可根據吸光度從標準曲線上換算。

4.正常范圍與臨床意義 須對正常人和相關疾病患者進行調查,確定正常上限。抗AchR抗體是MG的主要自身抗體,總的陽性率在63%、90%之間。抗體滴度基本上與病情嚴重程度相關。有效治療后該抗體水平下降,臨床惡化時又可見該抗體滴度上升。抗AchR抗體的陽性檢出率除與前述的抗原有關外,還與肌無力的臨床類型、人種和是否伴發其他自身免疫病等因素有關。我國人口中的MG總抗體水平較低,但在降低陽性標準后,其陽性率與歐美國家相近。然而,有部分MG患者血清中測不到抗AchR抗體。因此,抗AchR抗體陰性不能否定MG的診斷。應當指出,抗AchR抗體陽性還可見于膽汁性肝硬化、癲癇、強直性肌營養不良、DOWN病等。

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