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上海金穗生物科技有限公司
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蛋白質(zhì)純化離子交換法

時(shí)間:2013-1-16閱讀:173
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方法步驟:
1) 將Econo-Pac 管柱架好,并將三向閥及軟管等組合完成。
2) 震蕩DEAE Sephacel 膠體使的懸浮,小心倒入管柱中,讓膠體慢慢沈降,在沈降過程中隨時(shí)加入buffer A-0,勿使膠體干掉。
3) 待膠體沈降*后,高度應(yīng)在15 cm 左右。膠柱以buffer A-0 一直流洗,流速快慢可以不考慮;連接好收集器,每試管收2.5 mL。離子交換法的膠體平衡極為重要,可測流出液的pH 或離子濃度,看是否與buffer A-0 相同,若不一樣則需要再流洗的。
4) 樣本的添加方法同上述膠體過濾法,并啟動分劃收集器開始收集,當(dāng)樣本全部沒入膠體后,再加入同體積buffer A-0。以buffer A-0 流洗50 mL 后,去除膠體上方的緩沖液,但勿使膠體干掉。
5) 然后依序以buffer A-300, buffer A-500 溶離的,每批次流洗各50 mL,注意更換濃度時(shí),膠體上方勿殘存上一種溶液。
6) 收集所有分劃,進(jìn)行蛋白質(zhì)定量分析以及GUS 活性測定,結(jié)果作圖。
7) 收集GUS 活性區(qū),并以Centriprep-30 濃縮至 _______ mL (IEX),記得要保留100 μL。
8) 離子交換膠體以buffer A-0 洗過50 mL 后,收起來交回。

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