少妇无码精品12P_99久久精品国产免费看_色.www_国产黄a三级三级三级看三级黑人_亚洲AⅤ无码一区二区波多野_久久123

上海金穗生物科技有限公司
免費會員

氯化鈣法進行質體的轉形

時間:2013-2-20閱讀:239
分享:

方法步驟:
1) 進行轉形實驗前16~20 h,自 -70℃取出貯存的菌種,以劃單一菌落方式將菌株JM109 接種在SOB固體培養基上,在37℃培養。
2) 取40 mL SOB培養基裝入125 mL已滅過菌的三角瓶 (請記得加入Mg2+)。 另取1 mL SOB加于微量離心管中。 由SOB固體培養基上選4~6 個約2~3 mm大小的單一菌落接入1 mL SOB中,震蕩將菌體打散后,加入40 mL SOB中,于37℃震蕩培養約2~3 h,直至細胞數約為4~7×107/mL。 可于接菌2 h后每隔20~30 min測A600估計
3) 收集菌液于離心管中,置冰浴中10~15 min。
4) 以750~1,000 g 離心12~15 min (4℃)。
5) 倒去上清,并盡量將液體倒干,或以微量移液器頭吸干凈。
6) 沉淀加入1/3 菌液體積冰冷的0.1 M CaCl2,稍加震蕩,混合均勻,置冰浴中10~15 min。
7) 同上4), 5) 的操作。再重復6), 4), 5) 的操作,以使反應更*,增加成功率。
8) 加入1/25 菌液體積冰冷的0.1 M CaCl2,稍加震蕩使混合均勻。
◆ Competent cells 制備完成!
9) DNA 樣品 (<10 μL) 先裝于微量離心管中,置冰浴中預冷,另取一微量離心管,標上 #0,不加入任何DNA (作為negative control),亦置冰浴中預冷。
每個樣品加入200 μL 菌液,震蕩混合后,置冰浴中20~40 min。
10) 42℃加熱90 s (溫度及時間均需很準確,請事先檢查水浴鍋的溫度,不可超過42℃)。
◆ Heat shock!
11) 置冰浴中2 min。
12) 加入800 μL SOC,混合后,于37℃震蕩培養30~60 min。
13) 將各管轉形液上下搖動混合均勻后。#5 取20 μL 至另一離心管中,加入180μL SOC (稀釋10 倍),混合均勻后,涂布于SOC/Amp plate。 #0, #1~#4 各取200 μL 涂抹在SOC/Amp plate。 剩余菌液以6,000 rpm 離心1 min,倒去上清,沉淀加入200 μL SOC,均勻打散后涂抹在另一個SOC/Amp plate 上。
14) 待培養基表面的菌液*被吸收后,倒置培養皿于37℃培養16~20 h 后,觀察各個plate 上菌落的形狀并計算菌落數。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 蜜桃麻豆WWW久久囤产精品 | 三年片免费观看影视大全满天星 | 天天色天天搞 | 国产精品线在线精品 | 一区二区在线播放视频 | 国产四区| 亚洲婷婷六月的婷婷 | 国产精品久久免费视频在线 | 国产女人高潮叫床视频 | 成人免费在线观看网站 | 亚洲欧美日韩国产精品一区 | 亚洲最大天堂无码精品区 | 日韩精品一区二区三区四区视频 | 九九福利视频 | 天天看天天摸天天操 | 91精品国产乱码久久久软件 | 日韩黄色免费观看 | 国产AV无码精品国产精品 | 亚洲第一天堂网 | 老司机精品视频在线 | 久草网首页 | 中文字幕第15页 | 欧美日韩一区二区综合 | 四虎新网址 | 日本色中色 | 久久伊人精品一区二区三区 | aaa免费视频| 精品久久久一区二区 | 无人高清视频免费观看在线 | 99精品视频在线看 | www.av在线免费观看 | 日本黄色免费片 | 不卡一二区 | 亚洲精品无码久久久久SM | 欧美日韩免费观看视频 | 亚洲三区欧美一区国产二区 | 人妻夜夜添夜夜无码AV | 欧美日韩在线影院 | 亚洲黄色在线免费观看 | 一级片久久| 久久精品中文骚妇内射AV |