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上海金穗生物科技有限公司
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在微量滴定板中進行可溶性SCFv ElISA

時間:2013-3-4閱讀:229
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[器材和試劑]
● 9E10單抗(SantaCruzBiotech)
● PBS
● PBS/0.1%Tween 20(PBS/Tween)
● 4%MPBS
● 抗小鼠HRP標記抗體(例如Sigma目錄號A2554)
● 含有抗體片段的上清

[方法]
1.按每孔100pl蛋白抗原包被微量滴定板,4℃過夜。PBS中10ug/m1的濃度是包被抗原的標準濃度。但有時需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液(比如碳酸鹽緩沖液)。
2.棄去抗原液并用PBS洗滌板孔2次。
3.加入200gl的2%MPBS封閉每個板孔,37℃孵育2小時。
4.用PBS洗滌板孔3次。
5.每孔加入50ul的4%MPBS。
6.每孔加入50ul含可溶性抗體的培養基上清,用移液器反復吹吸混勻,室溫孵育1小時。
7.棄去溶液,用PBS/Tween洗滌板孔3次,再用PBS洗滌3次。
8.每孔加入100ul 9E10單抗(用2%MPBS按1:1000稀釋)。室溫孵育孔板l小時。
9.棄去溶液,用PBS/Tween洗滌板孔3次,再用PBS洗滌3次。
10.每孔加入抗小鼠HRP(用2%MPBS按1:2000稀釋)。室溫孵育孔板1小時。
11.棄去二抗,并用PBS/Tween和PBS分別洗滌3次。
12.每孔加入100ul TMB系統溶液,并在暗處室溫孵育10~30分鐘。數分鐘內,應呈現藍色。
13.每孔加入50~100ul終止液,終止反應。
14.在450nm處讀板。

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