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上海金穗生物科技有限公司
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小規模制備噬菌體上清

時間:2013-3-13閱讀:420
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[方法]
1.用巴氏吸管從單個噬菌斑中挑取噬菌體,并轉移到裝有200ul噬菌體緩沖液的微量管中。
2.70℃加熱20分鐘,再離心30分鐘以除去噬菌體上清液中的細菌。
3.用稀釋的含噬菌體的上清,感染X11-BlueTB細胞。噬菌體上清可于4℃保存。
4.無攪動孵育15分鐘,然后在37℃下劇烈振蕩孵育30分鐘。
5.鋪在LD-瓊脂培養基+Amp/G1u平板上,37℃孵育過夜。
6.在2m1 LB+Amp培養液中接種單個菌落,并在37℃下劇烈振蕩孵育(>350r/min),直到細胞密度達到OD600=0.25。
7.37℃下極溫和攪動孵育15分鐘。
8.用輔助噬菌體M13K07(moi=30)超感染,并加IPTG(終濃度為0.1mmol/L),溫和混合10分鐘,而后37℃下劇烈振蕩孵育5小時。
9。將培養液轉移到微量管中,以大速度離心30分鐘除去細菌;并在4℃保存噬菌體上清。其滴度一般高于1×1010TU/m1。

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