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上海金穗生物科技有限公司
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從微量樣本中同時提取mRNA和天然蛋白

時間:2014-5-20閱讀:288
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有時,細胞就是那么少,但又要開展多項分析,著實讓人為難。丹麥哥本哈根大學的研究人員開發出一種新方法,能從微量的樣本中同時提取mRNA和天然蛋白。這項成果發表在《BioTechniques》5月刊上。
在生物學研究的許多領域,樣本量往往很有限,特別是人體細胞和組織,如卵泡和胚胎干細胞。但是,研究人員經常需要開展多項分析,比如基因表達和蛋白分析。這就需要從同一個樣本中分離出RNA和蛋白質。不過,樣本本來就很少,分成兩份來操作更是不可能。
目前已有一些操作方案,能從少量樣本中同時提取出DNA、RNA和蛋白質。然而,大部分方法都需要將蛋白質變性,以保護RNA不受降解,這就使得一些需要天然蛋白的分析無法開展,比如酶活分析、非變性PAGE或免疫共沉淀。
一種新方法,能從含有少量細胞的樣本中同時純化mRNA和天然蛋白。這種方法改良自現有的變性磁珠oligo-dT方案,在天然狀態下分離mRNA和蛋白質,同時在4°C且還原劑存在時開展RNA分離,以減少RNA的降解。
他們采用Dynabeads® Oligo (dT)25磁珠來選擇性分離mRNA,同時以非離子型去污劑來取代離子型去污劑,以便更好地保護蛋白質的天然狀態。因此,裂解液中仍含有活性的RNase,但通過將mRNA與磁珠雜交時的溫度降至4°C,可有效抑制RNase的活性,同時他們延長了雜交時間。
研究人員在新生大鼠卵巢、人卵巢顆粒細胞(hGC)和人黃體(CL)上檢驗了這種新方法。他們測定了抑制素α亞基(Inha)和兩個看家基因(Rpl32和Gapdh)的mRNA表達,并測定了磷酸二脂酶(PDE)、caspase-3和乳酸脫氫酶(LDH)的酶活以及GAPDH和β-actin的免疫沉淀。
結果表明,這種方法在分離RNA的數量和質量上與現有的試劑盒相當,同時保留了有功能的蛋白質。他們也檢驗了標準oligo-dT方案下的RNA產量,發現Inha 、Rpl32和Gapdh基因所獲得的Cq值沒有差異。此外,酶活檢測也發現蛋白質未受RNA純化的影響。
這種方法能從含有少量細胞的樣本中同時純化mRNA和天然蛋白。當起始材料很少,或需要研究mRNA與蛋白活性的關聯時,這特別有用。 

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