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上海金穗生物科技有限公司
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16 2013-1

蛋白質(zhì)純化離子交換法

方法步驟:1)將Econo-Pac管柱架好,并將三向閥及軟管等組合完成。2)震蕩DEAESephacel膠體使的懸浮,小心倒入管柱中,讓膠體慢慢沈降,在沈降過程中隨時(shí)加入bufferA-0,勿使膠體干...

16 2013-1

蛋白質(zhì)純化親和層析法

藥品試劑:金屬螯合親和層析膠體(Ni-NTAagarose,QIAGEN30210)1mL◆在洋菜膠粒上接有nitrilotriaceticacid(NTA)官能基,可以螯合鎳離子;使用前先以鎳離子飽...

14 2013-1

變性膠體電泳與北方雜合分析

mRNA為單股,一般會(huì)卷繞成特定的三級(jí)結(jié)構(gòu),并與某些蛋白質(zhì)結(jié)合,而以messengerribonucleoproteinparticles(mRNPs)的型式存在于細(xì)胞內(nèi);自細(xì)胞抽取RNA時(shí),一般會(huì)以...

14 2013-1

用突變的VlCDR3構(gòu)建SCFv基因文庫

[方法]1.設(shè)計(jì)合成含有CDR3隨機(jī)化序列的VLFOR引物。當(dāng)然,此引物必須以擬進(jìn)行親和力成熟的抗體VL基因作為基礎(chǔ)進(jìn)行設(shè)計(jì)。本例中,VLCDR3的7個(gè)氨基酸被隨機(jī)化。在每個(gè)隨機(jī)化位點(diǎn)中,保留了大約5...

10 2013-1

創(chuàng)建輕鏈改組噬菌體文庫

[方法]1.配制50ulPCR反應(yīng)混合液,包含:●水,34.5ul●20XdNTP(每種5mmol/L),2,5ul●10XVent聚合酶緩沖液,5.0ul●LMB3引物(10pmol/u1),2.5...

10 2013-1

選擇和篩選親和力更高的抗體

選擇方法必須精心設(shè)計(jì)以便能選擇到親合力更高的抗體.而非那些在隙菌體中展示較佳、對(duì)大腸桿菌毒性較低、較為穩(wěn)定或者多聚化形成而改變親和性(avidity)使得功能性親和力提高的克隆。有兩種方法可用于從低親...

8 2013-1

原位免疫PCR的IHC增敏方法

(一)基本原理Sano等(1992)利用基因工程的方法表達(dá)了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功,建立了免疫PCR技術(shù)。這是一種新的抗原檢測(cè)系統(tǒng),利用細(xì)胞工程和基因工程技術(shù),巧妙地將抗原抗體反應(yīng)的特...

8 2013-1

提高IHC方法敏感性的輔助手段

1)蛋白酶消化蛋白酶消化可以去除覆蓋于抗原決定簇表面的雜蛋白,更為重要的是因甲醛固定而引起的交聯(lián)被打開,有利于抗原—抗體的結(jié)合,提高陽性檢測(cè)率。(2)抗原修復(fù)選擇適宜的修復(fù)液(pH值、離子濃度)、修復(fù)...

6 2013-1

膠體金探針的質(zhì)量鑒定

1。金顆粒的大小及均勻度用有Formvar支持膜的鎳網(wǎng)蘸取金標(biāo)記試劑,空氣干燥后,透射電鏡下觀察金顆粒的大小及均勻度,計(jì)算平均直徑,如電鏡放大倍數(shù)10萬,照片放大為2.5倍,100000×2.5=25...

6 2013-1

在基于gⅥ的展示載體中克隆cDNA文庫

1.利用PCR從預(yù)制的丸GTll文庫中制備cDNA插入片段:pG6質(zhì)粒是為帶有多聚T核苷酸的cDNA進(jìn)行方向性克隆而設(shè)計(jì)的。利用帶有各自閱讀框的三個(gè)載體,每個(gè)cDNA都有可能被正確翻譯,直到核糖體遇到...

4 2013-1

使用*抗原來選擇gⅥ-CDNA噬菌體文庫

[方法]1.在2m1的PBS2M緩沖液中打散2mg*磁珠(200ul)并在室溫下旋轉(zhuǎn)機(jī)中孵育l小時(shí),再用PBST沖洗磁珠3次。2.將2.5×1012TU的cDNA噬菌體文庫(大概要準(zhǔn)備250ml噬菌體...

4 2013-1

用免疫親和反應(yīng)選擇gⅥ—cDKA噬菌體文庫

[方法]1.用10m1含1%(w/v)BSA的PBST稀釋2.5ul抗血清,并倒入15ml聚丙烯管中,再加入1011~1012TU的gⅥ—cDNA噬菌體文庫。2.室溫下緩慢旋轉(zhuǎn)孵育該混合物1小時(shí)。3....

29 2012-12

V基因文庫的裝配和克隆

為構(gòu)建噬菌體抗體文庫,無論是scFv模式或是Fab模式,VH基因都需要與VL基因并列到同一質(zhì)粒中。雖然以下討論特別涉及scFv構(gòu)建,但其內(nèi)容同樣適用于Fab的構(gòu)建。在每種情況下,兩個(gè)V基因之間區(qū)域都起...

29 2012-12

制備scFv接頭DNA

[方法]1.在0.5ml微量離心管內(nèi)配制用于擴(kuò)增的主混合液。所顯示的主混合液用于VH—Vκ接頭。對(duì)于VH—Vλ接頭的主混合液,n=29。單個(gè)反應(yīng)主混合液/ul(n=25)●水37925●10×Vent...

27 2012-12

對(duì)scFv基因文庫及pHEN1噬菌體展示栽體的限制性消化

[方法]1,配制兩個(gè)100ulPCR反應(yīng)混合液來消化scFV文庫,其中1個(gè)用于VH-VκscFv文庫,另1個(gè)用于VH-VλscFv文庫,該混合液含有:●scFVDNA(1~4ug),50ul●水,33...

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