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如何選擇液相色譜儀的梯度洗脫與等度洗脫

時間:2015/4/17閱讀:5684
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有些色譜知識的都知道,液相色譜儀的梯度洗脫和氣相色譜儀中的程序升溫類似,給色譜分離帶來很大的方便,已成為液相色譜儀*的部分。

那么問題來了,什么是梯度洗脫?比等度洗脫有什么優(yōu)點呢?所謂梯度洗脫,就是有兩種或兩種以上不同極性的溶劑,在分離過程中按照一定程序連續(xù)地改變,以改變流動相的配比和極性。通常用的流動相為二元溶劑。在梯度運行期間,強溶劑B(如反相HPLC中的甲醇)的濃度增大。一般以這種溶劑中強溶劑B的體積比(%B)表示。

一、現(xiàn)在有許多實驗室在使用液相色譜儀的梯度洗脫技術(shù),這是因為梯度洗脫可克服等度洗脫中的一些弱點問題:

1、減少手工比例配比流動相,從而避免由此引起的誤差;

2 避免早流出峰分離度不好的缺點;

3避免晚流出峰峰變快峰高降低的缺點;

4 避免混合物容量因子范圍寬時分析時間長的缺點;

5 避免保留時間長的組分污染色譜柱的缺點。

二、梯度洗脫液相色譜儀適合于以下幾種分析情況:

1 具有較寬容量因子范圍的樣品,即組分較為復(fù)雜的;

大分子樣品,相對分子質(zhì)量大于1000的,尤其是生物樣品。

、一些含有高保留時間的組分會干擾樣品分析,如果在一次分析中不能把它洗脫出去,就會殘留污染色譜柱,并影響下一次的樣品分析。

4 即使在使用等度時也可以使用梯度洗脫選擇流動相的比例。

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