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滬鼎與您一起看免疫組化的實驗步驟及特點

時間:2014/4/30閱讀:1238
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免疫組化實驗步驟:
1.  石蠟切片置于67℃烘箱中,烘片2小時,脫蠟至水,用pH7.4的PBS沖洗三次,每次3分鐘(3×3’)。
2.  取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,加入微波盒中,微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔微波處理10分鐘,取出微波盒流水自然泠卻,從緩沖液中取出玻片,先用蒸餾水沖洗兩次,之后用PBS沖洗2×3’。(注:不是所有的抗體都需要微波修復的,視具體情況而定)
3.  每張切片加1滴3%H2O2,室溫下孵育10分鐘,以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。
免疫組化特點:
1.  在切片加上一抗后,第二抗體標記多聚螯合物酶(HRP)的復合物與一抗結合,在多聚螯合物上有大量的HRP分子,使抗原信號有顯著的放大,其敏感性較SABC、SP法高。
2.  由于多聚物在體內不存在,又不使用生物素,從而避免了由于生物素引起的非特異性背景染色,背景比SABC、SP法清晰。

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