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小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養方法

時間:2021/3/12閱讀:771
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平滑肌即無紋肌的通稱,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構成。它不構成獨立的器官,而只是成為構成體壁和內臟壁的因素(肌層)。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結構或中空器官;在功能上可以通過縮短和產生張力使器官發生運動和變形,也可產生連續收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。


小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關.如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發病時,可以檢測到氣管平滑肌發生數目的增生和肥大,表型也發生改變,由收縮型轉為合成型與分泌型,并分泌多種與細胞因子;而且出現向氣管腔遷移的跡象。


小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養

1.取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,泡于75%的酒精中

2.剖開胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中

3.在體視顯微鏡下,小心分離出下游支氣管

4.用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎

5.加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過夜消化

6.第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h

7.待液體變渾濁后加入*培養基終止消化,充分吹打

8.過100目篩網,收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清

9.用*培養基重懸沉淀,鋪瓶。

 

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