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ELISA不顯色成白板怎么破?

時(shí)間:2022/12/21閱讀:617
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在做ELISA實(shí)驗(yàn)中,相信大家或多或少難免會(huì)出現(xiàn)一些狀況,就在上周五,小編就在貼吧看到有個(gè)吧友發(fā)帖問(wèn)在做ELISA實(shí)驗(yàn),到顯色步驟結(jié)束后,酶標(biāo)板所有孔均無(wú)顏色。陽(yáng)性對(duì)照不顯色。那么今天上海勁馬請(qǐng)?jiān)奂夹g(shù)人員給大家分析分析

 

原因分析:試劑已過(guò)有效期,或不同試劑盒組分混用,檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)未過(guò)期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。

 

對(duì)策:不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用。                          

 

整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯(cuò)加其他試劑造成,如同時(shí)操作兩對(duì)半試劑時(shí),測(cè)HbsAb板用于測(cè)HBsAg等;實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)所有組分均屬于對(duì)應(yīng)的試劑盒。如盛標(biāo)本的試管四周常有血痂,易脫落,應(yīng)遠(yuǎn)離酶標(biāo)板。

 

elisa試劑盒超過(guò)有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào);試劑盒沒(méi)有按規(guī)定進(jìn)行留存,受高溫影響;實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)試劑未過(guò)期。孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃,孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作,保溫期內(nèi)不宜多開門,以免影響保溫。花板,一般是由于臨床標(biāo)本的收集、處理和留存方法不當(dāng)造成,放置時(shí)間(自然放置1~2h)及離心轉(zhuǎn)(3000r/min)、離心時(shí)間(15min)應(yīng)引起注意。

 

試劑、樣品用前未平衡至室溫從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡,20分鐘左右。錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑AB嚴(yán)格按說(shuō)明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,陰陽(yáng)性對(duì)照正常,質(zhì)控正常,但臨床標(biāo)本感覺(jué)顯色較弱,待測(cè)標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本,故結(jié)果可能是正常的,如有懷疑,可復(fù)檢標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑,酶免實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑,陰陽(yáng)性對(duì)照正常,但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽(yáng)性標(biāo)本未能檢出


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