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ELISA常用檢測方法優劣勢對比

時間:2023/4/12閱讀:793
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我們知道,Elisa可分為多種類型測定,是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。 我公司技術部將各種Elisa常用方法的優勢劣勢進行對比,結果如下:

一、直接法(direct Elisa)

將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。

1.優勢:操作手續簡短,因無須使用二抗可避免交互反應。

2.劣勢:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。

二、間接法(indirect Elisa)  

此測定方法與直接法類似,差別在于一級抗體沒有酶標記,改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

1.優勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它*多的免疫反應性。

2.劣勢:交互反應發生的機率較高。

三、雙抗體夾心法(sandwich Elisa)

被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其中一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量;或不標記,再透過酶標記的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應或競爭相同的抗原結合部位。

1.優勢:高靈敏、高專一性,抗原無須事先純化。  

2.劣勢:抗原一定得擁有兩個以上的抗體結合部位。                                                        

四、競爭法(competitive Elisa)  

樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體,當樣品里的自由抗原越多,就可以結合越多的抗體,而固定抗原就只能結合到較少的抗體,反之亦然。經清洗步驟,洗去自由抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只有固定抗原的對照組結果相比較,根據呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。  

1.優勢:可適用比較不純的樣本,而且數據再現性很高。

2.劣勢:整體的敏感性和專一性都較差。

 


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