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滬鼎生物|ELISA實驗不同樣本的處理

時間:2023/6/16閱讀:458
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上海滬鼎生物科技有限公司為您提供實驗室操作試劑包括elisa試劑盒,進口elisa試劑盒,培養(yǎng)基,血清,抗體,標(biāo)準(zhǔn)品,生化試劑。

   

ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠需要品質(zhì)好的試劑,良好的儀器和正確的操作。


通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的第一步。


不同類型的樣本的處理方法:

1.血清

血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。

用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清析出。(最好將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃1000×g離心20min,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

采血過程中應(yīng)避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。同時也應(yīng)避免細菌污染,因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。


2.血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本,標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。

常用的抗凝劑為EDTA等,檢測時還應(yīng)仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。


3.細胞培養(yǎng)上清

取細胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。


4.組織勻漿液

1) 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。

2) 將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分。

3) 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))。

4) 吸取勻漿液到離心管,4℃5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。


尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min,取上清即可檢測。


總的來說,因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。


為了保證檢測的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本最好在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進行檢測。另外,還應(yīng)保證樣本不含NaN3,因為NaN3會抑制HRP的活性,從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。


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