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滬鼎生物教你管理微生物菌種的有效方法

時間:2023/11/16閱讀:423
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一、菌株的采集


實驗室用菌種一是到國家法定機構(gòu)采購,二是購買商業(yè)派生菌種,三是科研中菌種交流。不管是哪種來源,均統(tǒng)一采集。采集中嚴格按照規(guī)范執(zhí)行。要求包裝可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保證菌種合格和環(huán)境安全。采集中要有菌種傳代標識。選擇有資質(zhì)的標準菌株的合格供應商,每批標準菌株必須附帶有供應商的合格證或檢測報告或說明書,來證明所采購的標準菌株是合格的。


二、標準菌株和驗收


實驗室收到標準菌株,首先應進行符合性感官檢查,記錄菌株號和標準菌株來源途徑信息,確保溯源性清楚。同時還應記錄標準菌株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無破損等情況。


三、凍干標準菌株的復活


1.開啟產(chǎn)品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,再打開使用。


2.復活:選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行復活。菌種的首-次活化最-好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上,除非特殊情況或特別推薦,一般不用液體培養(yǎng)基。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過5代,從標準菌株保藏中心購買的凍干標準菌株為第F0代。


四、工作菌株確認方法及依據(jù)


用無菌接種環(huán)取上述培養(yǎng)物,在相應的培養(yǎng)基平板(營養(yǎng)瓊脂、大豆胰蛋白胨瓊脂)上或相應的細菌鑒別平板(如伊紅美藍、麥康凱、BP等上劃線分離單個菌落,置適宜條件下培養(yǎng)(若該類微生物為厭氧菌,則培養(yǎng)條件應為厭氧條件)。以同樣方法取真菌和酵母菌至SDA(薩布羅培養(yǎng)基)平板上或玫瑰紅鈉培養(yǎng)基平板上,23~28℃下培養(yǎng)7d;培養(yǎng)后觀察是否具有典型的菌落狀態(tài),然后挑取單一純菌落,進行革蘭染色、鏡檢,觀察其染色特征及菌體形態(tài)以確定菌種。


五、 污染處理


假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他菌落生長,則說明操作有污染或菌種不純。要將該污染培養(yǎng)物做滅菌處理,尋找原因,重新分離挑選純菌落。


六、菌種保存


所有菌種均由實驗室專人(雙人雙鎖)保存于專用冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記臺帳,詳細記錄菌種采集、保管、制備、使用、處置情況;每一種菌種一定要有檢測鑒定報告(具體的的鑒定方法見菌種質(zhì)量報告鑒定證書上的方法);具體菌種保存方法一般為:將復蘇后肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例(肉湯8.5mL+甘油1.5mL)混合,-30 ℃凍存,(可用2mL凍存管凍存多管),作為保藏儲備菌株F1代,也可使用商品化的菌種保存管。


七、菌種的傳代


1.標準菌株的復蘇


① 菌種操作應在無菌條件下進行,防止雜菌污染。


② 每次使用和復蘇時只需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養(yǎng)。


2.標準儲備菌株每轉(zhuǎn)接一次須進行確認。


3.工作菌株轉(zhuǎn)接的方法


①配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(溶血性弧菌加3%氯化鈉 ),121℃高壓滅菌15分鐘后分裝在試管內(nèi),冷卻后備用。


②在無菌條件下,用接種環(huán)挑取菌苔至新鮮試管上作“米"字形劃線接種,放置在36℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時。


4.工作菌株的使用


①內(nèi)部質(zhì)量控制:一個月一次陽性對照、培養(yǎng)基每批驗收;


②外部質(zhì)量控制:能力驗證、實驗室比對;


③工作菌株的期間核查。期間核查的頻率為每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。工作菌株期間核查的方法及依據(jù)同工作菌株的確認一樣。建立標準菌株期間核查記錄。


八、菌種的標識


菌種代數(shù)的計算為干粉菌種為第0代,轉(zhuǎn)接一次加一代。


九、菌種的保藏


①將試管內(nèi)菌種放入冰箱中2~8℃冷藏保存。


②將傳代并經(jīng)過培養(yǎng)后的菌種放入冰箱中2~8℃保存。每支保存菌種需標明菌名、標準編號、傳次、傳代日期。


十、菌種的銷毀


①菌種使用后或超過貯存期的應進行銷毀。


②需銷毀的菌種,應用高壓蒸汽(121℃)滅菌30分鐘。


③滅菌后,再進行清洗和處理。


④銷毀的菌種應做好記錄。銷毀時由化驗負責人監(jiān)督銷毀,保管人員負責銷毀。


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