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雞BADELISA試劑盒

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BADELISA試劑盒

 

 

 

檢測范圍: 96T

 

0.6pg/ml-22pg/ml

 

使用目的:

 

本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中 BAD 含量。

 

實驗原理

 

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞 BAD 水平。用純化的雞 BAD 抗體包被微孔

 

板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 BAD,再與 HRP 標記的 BAD 抗體結合,

 

形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催

 

化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 BAD 呈正相

 

關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中雞 BAD 濃

 

度。

 

試劑盒組成

 

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

 

 

 

 

 

 

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(40pg/ml

0.5ml×1

 

 

 

 

 

 

3

酶標包被板

12 ×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

 

 

 

 

 

 

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

 

 

 

 

 

 

5

顯色劑 A 液

6ml×1

11

封板膜

2

 

 

 

 

 

 

6

顯色劑 B 液

6ml×1/

12

密封袋

1

 

 

 

 

 

 

標本要求

 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

 

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

 

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟

 

  • 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

 

釋。

 

20pg/ml

5 號標準品

150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

 

 

10pg/ml

4 號標準品

150µl  5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

 

 

5pg/ml

3 號標準品

150µl  4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

 

 

2.5pg/ml

2 號標準品

150µl  3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

 

 

1.25pg/ml

1 號標準品

150µl  2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

 

 

 

 

 

 

  • 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl

 

 

然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

 

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

 

  • 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

 

  • 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

 

  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。

 

  • 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。

 

  • 溫育:操作同 3

 

  • 洗滌:操作同 5。

 

  • 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

 

15 分鐘.

 

  • 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

 

  • 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

 

操作程序總結:

計算

 

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

 

OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

 

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,

 

即為樣品的實際濃度。

 

注意事項

 

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

 

用完,板條應裝入密封袋中保存。

 

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

 

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

 

控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

 

4 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD

 

大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計

 

算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

 

5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

 

6.底物請避光保存。

 

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

 

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

 

9.本試劑不同批號組分不得混用。

 

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

 

保存條件及有效期

 

1.試劑盒保存:;2-8℃。

 

2.有效期:6 個月

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