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聯(lián)系人：陳立剛 （總經(jīng)理）

技術(shù)文章

液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法分析羅漢果皂甙

閱讀：802發(fā)布時(shí)間：2007-1-26

   摘要：【目的】建立羅漢果皂甙的HPLC/ESI/MS2 定性分析方法?！痉椒ā坎捎靡合嗌V-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)羅漢果皂甙提取物進(jìn)行分離分析?！窘Y(jié)果】根據(jù)主要色譜峰的質(zhì)譜特征，初步鑒定出羅漢果皂甙提取物中主要的皂甙成分為11-氧-羅漢果皂甙V（11-oxo-mogroside-V）、羅漢果皂甙V（mogroside-V）、羅漢果皂甙IV（mogroside-IV）、羅漢果皂甙VI（mogroside-VI）和賽門(mén)甙I（siamenoside-I）。【結(jié)論】對(duì)于羅漢果皂甙的分離及定性分析，液相色譜-電噴霧質(zhì)譜(HPLC／ESI/MS2)聯(lián)用分析法是一種方便快捷有效的方法。
    關(guān)鍵詞：羅漢果(Siratia grosvenori)；羅漢果皂甙；液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法
    羅漢果是廣西特產(chǎn)中藥，研究表明，強(qiáng)甜味的非糖物質(zhì)三萜類(lèi)成分羅漢果皂甙（mogroside）是其主要成分[1,2]。羅漢果皂甙屬*烷型化合物，種類(lèi)較多，結(jié)構(gòu)相似，迄今已從羅漢果果實(shí)中分離并鑒定出11 種葫蘆烷三萜甙類(lèi)（cucurbitane glycoside）化合物[3～5]。
    羅漢果皂甙的藥理作用已有研究[6～9]，因此建立快速、準(zhǔn)確的羅漢果皂甙分析鑒定新方法，對(duì)其生物活性的研究具有重要理論意義。若采用薄層色譜法或高壓色譜法等傳統(tǒng)方法分析檢測(cè)羅漢果皂甙提取物中的羅漢果皂甙，需用標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行定性分析，但羅漢果皂甙的標(biāo)準(zhǔn)樣品目前尚無(wú)供應(yīng)廠商，自行分離或合成標(biāo)準(zhǔn)樣品則費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因此給羅漢果皂甙的定性分析帶來(lái)諸多不便。
    電噴霧（ESI）是一種軟電離技術(shù)，能夠有效地收集離子和提供大量的碎片信息，易于與液相色譜聯(lián)用（HPLC/MS），這種聯(lián)用技術(shù)具有分析速度快、分辨率高和靈敏度高的特點(diǎn)，并且具有對(duì)分析的樣品進(jìn)行快速定性的能力，已廣泛應(yīng)用于藥物的檢測(cè)和定性及其它領(lǐng)域。有關(guān)皂甙類(lèi)化學(xué)成分的液質(zhì)聯(lián)用分析已有報(bào)道[10]，但對(duì)羅漢果中主要皂甙成分的液相分析及其電噴霧質(zhì)譜研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文利用液相色譜-電噴霧-質(zhì)譜／質(zhì)譜聯(lián)用的方法分離羅漢果皂甙提取物，并對(duì)其中的主要皂甙成分進(jìn)行了定性分析，方法簡(jiǎn)便快速。

    羅漢果皂甙提取物的制備
    取500.00 g 羅漢果鮮果搗碎后用8 倍的水于80℃下提取3 次，每次1 h，過(guò)濾，收集濾液，于60℃下真空濃縮后調(diào)pH 9.0，然后上大孔樹(shù)脂D101 柱，依次用蒸餾水、30%乙醇溶液、60%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集60%乙醇洗脫液后，經(jīng)真空濃縮、冷凍干燥即得2.50 g 羅漢果皂甙提取物，經(jīng)分光光度法分析[11,12]，該提取物的總皂甙
含量≥98%。

    HPLC/ESI/MS 分析
    樣品溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取羅漢果皂甙提取物0.0100 g，用23%乙腈溶解并定容至10 ml。
    色譜條件：柱型：Hypersil ODS C18 柱（250 mm×4.6mm ID，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈∶水∶NH4Ac=23∶77∶0.05；柱溫：30℃；流速：0.3 ml·min-1；進(jìn)樣量：1.0 μl。
    質(zhì)譜條件：ESI 離子源電離，噴射電壓：5 000 V；毛細(xì)管溫度：250℃；噴射壓力：25.0 PSI；干燥氣流速：8.0 L·min-1；干燥氣溫度：250℃；掃描質(zhì)量范圍：100～1700 amu。負(fù)離子模式。

    ESI/MS2 分析
    ESI 離子源電離，噴射電壓：3 500V；毛細(xì)管溫度：250℃；噴射壓力：20.0 PSI；干燥氣流速：8.0 L·min-1；干燥氣溫度：350℃；掃描質(zhì)量范圍：100～1700 amu。負(fù)離子模式。

參考文獻(xiàn)略

文章摘自:《中國(guó)新藥與臨床雜志》2005年7月,第24卷，第7期
作者：劉世坤, 裴奇,李佐軍,周于祿,李兵


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