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試劑盒名稱：小鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶elisa試劑盒

英文名稱：Mouse phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK elisa Kit

規(guī)    格：96T
保存條件：2-8℃

自備材料：
1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

4.  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

5.  7℃恒溫箱。

實驗步驟：
1.分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。人雌激素（E）每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鐘。
2.棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。
3.人雌激素（E）每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
4.取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
5.人雌激素（E）測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。?測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
6.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，人雌激素（E）再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

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