ELISA試劑盒以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，*較呈直線的部分是的檢測區域。
因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。
測定大分子量物質的夾心法ELISA試劑盒，標準曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數紙，以檢測物的濃度為橫坐標。
酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。
如有細菌污染，菌體中能夠富含內源性HRP，有國內報導酶免HAg試劑檢測溶血標本時可構成假陽性。如在冰箱中保管過久，其間的IgG可發作聚合，在直接法ELISA試劑盒中可使本底加深。
內源性煩擾物：類風濕因子(RF)、黃疸等，類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的本身抗體，大都為IgM類，能充任抗原成分與固相及酶標抗體反響，然后出現非特異性顯色。
黃疸血標本中常富含內源性過氧化物酶，如用辣根過氧化物酶為符號物，就有能夠發作非特異性顯色。
血標本在收集處置時應留心，在冰箱中保管不易過久。
ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。
先將*標記的抗體同時溫育。洗滌后，ELISA試劑盒加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。
影響ELISA試劑盒中非特異性顯色的緣由許多，如試劑盒特異性、查驗標本中含酶符號物的煩擾物，操作進程中的疑問。
外源性煩擾物，常常因樣品收集、儲存、處置不妥構成如樣品溶血，被細菌污染，標本凝聚不全等。
溶血標本，紅細胞溶解割裂，釋放出血紅素構成，而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標本能夠會添加非特異性顯色。
ELISA試劑盒顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。ELSIA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致.
有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。
ELISA試劑盒底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
