ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚，即加標本，加酶聯絡物，加底物。
加標本通常用微量加樣器，按規矩的量參與板孔中。
每次加標本應更換吸嘴，以發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按規矩的稀釋度稀釋后再加樣。
也可在板孔中參與稀釋液，再在其參與血清標本，然后在微型轟動器上轟動1分鐘以確保混和。
單克隆抗體的運用使測定抗原的ELISA試劑盒前進到新水平。
ELISA試劑盒這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如運用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著前進。
加酶聯絡物運用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液進程迅速結束。
在雙抗體夾心法測定抗原時，如運用關于抗原分子上兩個不一樣抗原決定簇的單克隆抗體別離作為固相抗體和酶標抗體。
加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留心不可濺起，不可發生氣泡。
ELISA試劑盒則在測守時可使標本的參與和酶標抗體的參與兩步并作一步。
