ELISA試劑盒實驗陽性斷定值（cut-off value）通常為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判別成果陽性或陰性的規(guī)范。
用此法判別成果請求實驗條件十分穩(wěn)定，試劑的制備有必要規(guī)范化，陽性和陰性的對照品應(yīng)契合一定的規(guī)范，須配用精密的儀器，并嚴厲按規(guī)定操作。
陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中經(jīng)過對很多標本的實驗檢查而得到的。
ELISA試劑盒現(xiàn)舉某種檢查HBsAg的試劑盒為例。
平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個特定的數(shù)值（例0.400），實驗才有用。
3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)模，則棄去，而已另兩個陰性對照從頭核算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上規(guī)模，則該次實驗無效。
應(yīng)留意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。
根據(jù)以上敘說能夠看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到實驗的質(zhì)控效果，試劑蛻變和操作不妥均會發(fā)生"實驗無效"的后果。
標本/陰性對照比值
在實驗條件（包含試劑）較難確保穩(wěn)定的情況下，ELISA試劑盒這種判別法較為適宜。
在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這兒的P不代表陽性（positive），而是患者（patient）的縮寫，不該誤解。為防止混淆，更宜用S/N表明。
ELISA試劑盒陽性斷定值按下式核算：陽性斷定值=NCX+0.05，標本A值＞陽性斷定值的為陽性，小于陽性斷定值的為陰性。
在競賽法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反響中酶結(jié)合物的濃度和參加競賽按捺物的量，通常調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此刻反響zui為敏感。
競賽法ELISA不易用自視判別成果，因肉眼很難區(qū)分弱陽性反響與陰性對照的顯色區(qū)別，通常均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。
核算方法首要也有兩種，即陽性斷定值法和按捺率法。
陽性斷定值法
與間接法和夾心法中的陽性斷定值法根本一樣，ELISA試劑盒但在核算公式中引進陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢查抗HBc的試劑盒為例。
試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。
每次實驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先核算陰性對照A值的平均值（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（N-P）有必要大于一個特定的數(shù)值（例如0.300）,實驗才有用。
3個陰性對照A值均應(yīng)小于2.000，并且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)模，則棄去，而以另2個陰性對照從頭核算×NCX；如有2個陰性對照A超出以上規(guī)模，則該次實驗無效。
ELISA試劑盒陽性斷定值按下式核算：陰性斷定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標本A值≤陽性斷定值的反響為陽性，A＞陽性斷定值的反響為陰性。
