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ELISA試劑盒檢測細胞因子的優缺點

閱讀:1054發布時間:2017-10-12

從21世紀初期,ELISA試劑盒因為免疫學研究中一個十分活躍的范疇就是細胞因子的研究,它的檢測成為現代生物科學研究的重要方面。國內搶先的生物廠家,運用抗原、抗體反響的原理已研發出了高靈敏度(sensitive)、高特異性、高度配套的細胞因子檢測試劑盒,出產的檢測試劑盒包括簡直一切的細胞因子。根據檢測辦法不同,可分為ELISA測定(酶聯免疫)和放射免疫測定。
1. 放射免疫測定
放射免疫測定是將同位素剖析的高靈敏度與抗原抗體反響的特異性相結合,辦法大多選用競賽法原理。待檢的細胞因子與放射性同位素符號的細胞因子競賽與細胞因子抗體(多克隆抗體或單克隆抗體)結合,再經過別離劑別離結合狀態的符號物,計數后根據標準曲線即可計算出細胞因子的量。本法具有靈敏度高(可檢測出ng乃至pg水平),特異性強、性好等特色。
2.ELISA試劑盒測定
2-1.酶聯免疫斑駁(ELISPOT) 檢測試劑盒是根據定量夾心ELISA法原理,將影響后的細胞滴加到包被在貼PVDF微孔中,放置于37℃孵育。在孵育的進程中,細胞排泄的細胞因子即會被包被的抗體所捕獲,以下的進程與一般的ELISA試驗相同,zui終用不溶性的酶聯底物進行顯色,每一個顯色點(斑駁)既代表一個排泄細胞因子的細胞。經過的ELISPOT剖析儀或在顯微鏡下進行計數,就可以進行剖析。ELISPOT法用于檢測單個細胞排泄的細胞因子,綜合了一般ELISA辦法的高特異性和定量的長處,并且具有生物活性剖析得出與功用相關的成果的長處。
2-2.雙抗夾心ELISA法 雙抗體夾心法需制備針對細胞因子不同位點的兩個單克隆抗體,一個抗體作為固相抗體用于包被,另一個作為符號抗體。可選用慣例雙抗夾心法,也可選用一步法。因為血清中細胞因子的含量很低。慣例ELISA法不能滿足要求,需引入*-親合素體系來進步靈敏度,即參加樣品后參加*符號的另一個抗體,再參加親合素及*化的酶,再參加底物進行顯色,顏色與待檢的細胞因子量呈正比
三、ELISA試劑盒檢測細胞因子的優缺陷
A. 長處
1.特異性強,這是符號免疫技能的共同特色。
2.運用簡潔,省時。
3.重復性好,影響要素少,試驗成果安穩。
B. 缺陷
1.測定的是蛋白的含量而不是生物學活性。
2.檢測的靈敏度不如生物學活性法。
3.因為各個試驗室制備的抗體不同,同一樣品用不同ELISA試劑盒檢測的成果也不一樣,試驗室之間難以進行質量操控

 


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