ELISA 試劑盒制備抗體：
根據(jù)項目溝通結(jié)果確定制備抗體的種類，一般夾心ELISA需要不同表位的抗體用做配對，建議同時進行多克隆抗體和單克隆抗體的制備。確保的獲得靈敏度的配對方式。其他類型的ELISA根據(jù)具體情況選擇。
1、 實驗動物免疫
使用部分制備的免疫原免疫2只新西蘭兔和5只BALB/c鼠分別用于多克隆抗體及單克隆抗體的制備。免疫4-5次，收集抗血清檢測效價，ELISA效價大于10萬以上進行多克隆抗血清收集及單克隆抗體雜交瘤制備。

2、 單克隆抗體雜交瘤制備
選擇與重組蛋白和天然蛋白免疫反應(yīng)強的小鼠進行細胞融合，通過ELISA篩選陽性克隆，將陽性克隆進行亞克隆獲得陽性細胞株。將陽性克隆上清進行表位鑒定，反應(yīng)性鑒定及親和力鑒定。選擇不同表位，反應(yīng)性強且親和力高的細胞株進行后續(xù)抗體生產(chǎn)。
3、 抗體生產(chǎn)
多克隆抗血清進行抗原親和純化，獲得特異性抗體10-20 mg。
單克隆抗體生產(chǎn)選擇所需陽性細胞株進行細胞擴增，腹水制備，通過蛋白A親和純化獲得3-5 mg 純化抗體。

ELISA 試劑盒制備
1、 抗原或抗體標記
根據(jù)開發(fā)ELISA的類型確定標記抗原或者抗體。一般標記HRP 或者生物素。

2、 抗原抗體使用濃度優(yōu)化
檢測不同濃度抗原與抗體的反應(yīng)靈敏度，特異性。確定的抗原與抗體的使用濃度。
3、 包被條件及反應(yīng)條件優(yōu)化
確定包被緩沖液，洗滌緩沖液及酶結(jié)合物保存液；確定抗體反應(yīng)溫度及反應(yīng)時間。
4、 回收率測定
將標準品加入陰性樣品中確定回收率，需達到80%-120的回收范圍。
5、 批間差及批內(nèi)差測定
重復(fù)性檢測，批間差及批內(nèi)差需小于15%。
6、 穩(wěn)定性測試
通過37度破壞性試驗檢測試劑盒在37度條件下3天，7天，10天，14天的表現(xiàn)。同時4度留樣以備長期檢測。一般試劑盒可在4度存放1年。
7、 臨床樣品或真實樣本檢測
將客戶提供的其他方法驗證的陽性樣品和陰性樣品進行重復(fù)驗證檢測，確定符合率。
8、 試劑盒組裝
組裝5份ELISA試劑盒包括所有組分及說明書