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內臟脂肪細胞培養過程

時間:2022/3/7閱讀:366
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培養:
1、取出小鼠后瀝干酒精,放入超凈臺內,固定在泡沫板上。
2、用鑷子提起皮膚,用解剖剪剪開皮膚一個橫切口,將皮膚向上撕開,然后剪開肌肉等,暴露出腹腔,在左側找到脾臟,用彎頭眼科鑷取出脾臟,置于無菌培養皿中。
3、用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次,并剔除多余無用的組織。
4、將篩網置于平皿中,脾臟置于篩網上,用彎頭鑷鑷住,輕輕在篩網上進行碾磨,同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。
5、將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中,離心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6、加入10ml培養液,吹打混勻,取樣計數。
7、將稀釋好的細胞懸液分裝于培養瓶中,輕輕搖晃混勻,在培養瓶上。

運輸和保存:
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。


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