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實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL，37°C孵育1小時(shí)；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時(shí)；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。
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樣品收集、處理及保存：
1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2）細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3）血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4）血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
5）體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6.）組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。
樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
7）保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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檢測程序：
1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37℃暗處反應(yīng)15 分鐘。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450 nm處測吸光值。
ColⅢ elisa試劑盒規(guī)格操作步驟：
1）運(yùn)用前，將所有試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫，防止加樣時(shí)參加很多的氣泡，發(fā)生加樣上的差錯(cuò)。
2）依據(jù)待測樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個(gè)規(guī)范品和空白孔主張做復(fù)孔。每個(gè)樣品依據(jù)自個(gè)的數(shù)量來定，能運(yùn)用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后參加50ul于反響孔內(nèi)。
3）參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內(nèi)。當(dāng)即參加50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，悄悄振動(dòng)混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗刷液，振動(dòng)30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。
5）每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，悄悄振動(dòng)混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗刷液，振動(dòng)30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。
7）每孔參加底物A、B各50ul，悄悄振動(dòng)混勻，37℃溫育10分鐘。防止光照。
8）取出酶標(biāo)板，敏捷參加50ul停止液，參加停止液后應(yīng)當(dāng)即測定成果。
9）在450nm波利益測定各孔的OD值。
美味牛肝菌CA6  碳酸酐酶6抗體100 ul

禾粘座孢霉（或禾漆斑菌）CA7  碳酸酐酶7抗體100 ul

白杯絲座孢CCBE1  膠原蛋白和鈣結(jié)合表皮生長因子結(jié)構(gòu)域1抗體100 ul

褐色小杈枝霉CCDC102B  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B抗體100 ul

須殼孢CCDC16/ZNF83  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白16抗體100 ul

茶葉葉點(diǎn)霉CCDC21  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白21抗體100 ul

露濕粘座孢霉（或露濕漆斑菌）CCDC52  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52抗體100 ul

爪哇毛霉CCDC6  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體(狀甲狀腺癌編碼蛋白)100 ul

煙草鐮刀菌CCDC7  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體20 ul

印度肯德座霉CCDC80  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白80抗體100 ul

禾谷炭疽菌CD163L1  CD163蛋白樣1抗體100 ul

木賊鐮刀菌CDAN1  先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血蛋白1抗體100 ul

柱彎孢CDK2AP2  細(xì)胞周期素依賴激酶2相關(guān)蛋白2抗體100 ul

近緣彎孢CEACAM21  癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子21抗體100 ul

瓜類炭疽菌CDKAL1  周期素依賴性激酶5調(diào)節(jié)蛋白1樣蛋白1抗體20 ul

蔥炭疽菌CEACAM16/CEAL2  癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子16抗體100 ul

新月彎孢CEACAM19/CEAL1  癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子19抗體100 ul

螺卷毛殼ADCK5  ADCK5蛋白抗體20 ul
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