1.取出人源細(xì)胞爬片放到35mm或60mm用過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)皿里，PBS洗三遍。

注意：有的時(shí)候作的細(xì)胞爬片可能比較小，因此夾取的時(shí)候要小心，注意 反正面，放在皿里洗比較方便，避免了來(lái)回夾取，另外洗的時(shí)候加PBS不要太沖，不要細(xì)胞沖下來(lái)。洗的時(shí)候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，沒(méi)有等5分鐘或10分鐘。

2. 4%冷的多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。

3. 0.2%Triton X-100通透10分鐘，PBS洗三遍。

4. 人源細(xì)胞與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，PBS洗三遍。

5. 一抗4度濕盒內(nèi)過(guò)夜，也可37度2小時(shí)，感覺(jué)前者效果好，PBS洗三遍。

6.二抗室溫2小時(shí)(避光)，或者37度1半小時(shí)，PBS洗三遍。

7.用DAPI染核，然后直接照熒光片。

8.蒸餾水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周，因?yàn)楦视筒幌髽?shù)脂那樣會(huì)干，所以不用指甲油封的話(huà)會(huì)弄的一塌糊涂。

建議：1.人源細(xì)胞還是染完之后沒(méi)有封片前直接照一些，因?yàn)橛械臅r(shí)候可能封片會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題，再想照反而沒(méi)有了，另外不要拖太長(zhǎng)時(shí)間，熒光會(huì)崔滅的。2.熒光的片子一定要避光保存，保存的好的話(huà)，過(guò)一段時(shí)間仍然能照出很好的片子。3.二抗用之前一定離心，不然有的時(shí)候有那種沉淀，在片子上就是一個(gè)很大的非特異性熒光光點(diǎn)，非常難看。