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傳代時間-人源細胞和昆蟲細胞該怎么安排?

時間:2017/8/3閱讀:374
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細胞密度
人源細胞:貼壁培養(yǎng)細胞進入對數(shù)生長期、未達到匯合狀態(tài)時即應進行傳代。正常細胞達到匯合狀態(tài)時會停止生長(接觸抑制),重新接種后需要較長時間才能恢復。轉(zhuǎn)化細胞即使達到匯合狀態(tài)也能繼續(xù)增殖,但是在經(jīng)過大約兩個倍增時間后通常會變質(zhì)。類似地,懸浮培養(yǎng)的細胞進入對數(shù)生長期、未達到會和狀態(tài)時也應進行傳代。達到匯合狀態(tài)時,懸浮培養(yǎng)的細胞會聚集成團塊,轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶時培養(yǎng)基會變得渾濁。
● 昆蟲細胞:昆蟲細胞進入對數(shù)生長期、未達到匯合狀態(tài)時應進行傳代。牢固貼壁的昆蟲細胞達到匯合狀態(tài)時也可傳代,雖然此時細胞更容易從培養(yǎng)器上解離下來,但是如果反復將昆蟲細胞在密度超過匯合的狀態(tài)下傳代,細胞的倍增次數(shù)會減少,活力會降低,貼壁能力也會下降。另一方面,將貼壁培養(yǎng)的昆蟲細胞在達到匯合狀態(tài)前傳代需要較大的機械力,才能使細胞從單細胞層中脫離。反復在達到匯合狀態(tài)前傳代,會導致細胞倍增次數(shù)減少,活力降低,健康度較差。

培養(yǎng)基耗竭
● 哺乳動物細胞:生長培養(yǎng)基pH值降低,通常表示乳酸蓄積,乳酸是細胞代謝的副產(chǎn)物。乳酸有細胞毒性,而且pH值減低也是細胞生長的不利因素。pH值改變的速度通常取決于培養(yǎng)體系中的細胞濃度,細胞濃度越高,培養(yǎng)基耗竭的速度越快。如果發(fā)現(xiàn)pH值迅速降低(>0.1-0.2 pH單位),同時細胞濃度增大,則應對細胞進行傳代。
● 昆蟲細胞:用于昆蟲細胞培養(yǎng)的生長培養(yǎng)基通常比哺乳動物細胞培養(yǎng)基酸度大。例如,用于Sf9細胞培養(yǎng)的TNM-FA和Grace 培養(yǎng)基的pH 值為6.2。與哺乳動物細胞培養(yǎng)過程不同,昆蟲細胞生長時培養(yǎng)基的pH值會逐漸升高,但一般不會超過6.4。但是,與哺乳動物細胞一樣,昆蟲細胞達到較高密度后生長培養(yǎng)基的pH值也會開始降低。

傳代時間安排
嚴格按照預定時間進行細胞傳代可確保細胞的生物學行為穩(wěn)定,便于監(jiān)測其健康狀態(tài)。從某一接種密度開始逐漸調(diào)整細胞接種密度,直到達到適合該細胞的穩(wěn)定生長速度和產(chǎn)量。人源細胞偏離如此確定的生長模式通常表示細胞健康狀況不佳(例如:變質(zhì)、污染)或者培養(yǎng)體系的某一組分功能異常(例如:未達到zuih 溫度、培養(yǎng)基過于陳舊)。我們強烈建議您保留詳細的細胞培養(yǎng)記錄,記錄加料和傳代時間、所用培養(yǎng)基種類、解離方法、分種率、形態(tài)學觀察結(jié)果、接種濃度、產(chǎn)量和抗生素用法。

按照傳代時間安排開展實驗和其他非常規(guī)操作(如更換培養(yǎng)基種類)。如果您的實驗安排與常規(guī)傳代時間安排不吻合,則應確保當細胞仍處于延滯期或者已經(jīng)達到匯合狀態(tài),停止生長時,不進行傳代。
anti-IAP-5      規(guī)格:    規(guī)格:     0.2ml    產(chǎn)品名稱:    凋亡抑制因子5抗體
Anti-IASPP      規(guī)格:    規(guī)格:     0.1ml    產(chǎn)品名稱:    腫瘤細胞凋亡ASPP家族的另一個成員抗體
Anti-ICAD  Caspase     規(guī)格:    規(guī)格:     0.2ml    產(chǎn)品名稱:    激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑
Anti-IDE      規(guī)格:    規(guī)格:     0.1ml    產(chǎn)品名稱:    胰島素降解酶抗體
Mouse Anti-influenza A virus nucleoprotein Monoclonal      規(guī)格:    規(guī)格:     0.1ml    產(chǎn)品名稱:     鼠抗人禽流感A核蛋白單克隆抗體
人源細胞

 

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