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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第9年

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ATCC細(xì)胞
檢測(cè)試劑盒
elisa檢測(cè)試劑盒
分子生物學(xué)
培養(yǎng)基
生化試劑
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質(zhì)粒
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細(xì)胞培養(yǎng)
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標(biāo)準(zhǔn)品

原代細(xì)胞凍存法之真空冷凍干燥法

時(shí)間:2018/1/16閱讀:309
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原代細(xì)胞冷凍,在減壓下利用升華作用除去水分,使細(xì)胞的生理活動(dòng)趨于停止,從而長(zhǎng)期維持存活狀態(tài)。
操作步驟如下:
好氧菌冷凍干燥管的制備
1 安瓿管準(zhǔn)備
安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時(shí),先用2%鹽酸浸泡過(guò)夜,自來(lái)水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標(biāo)簽,標(biāo)上菌號(hào)及時(shí)間,加入脫脂棉塞后,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。
2 保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備
保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時(shí),應(yīng)注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過(guò)濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鐘,備用。
3 凍干樣品的準(zhǔn)備
在Z適宜的培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,進(jìn)行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺(tái)聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測(cè)技術(shù)規(guī)程》(試行)),與保護(hù)劑混合均勻,分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于108-1010個(gè)/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個(gè)活細(xì)胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長(zhǎng)的毛細(xì)滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為半個(gè)球部。若是液體培養(yǎng)的微生物,應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,然后將培養(yǎng)物與保護(hù)劑混勻,原代細(xì)胞再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時(shí)間盡量要短,在1-2小時(shí)內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時(shí)應(yīng)注意在無(wú)菌條件下操作。
69-72-7         水楊酸片標(biāo)準(zhǔn)品    30tables
302-79-4         維A酸標(biāo)準(zhǔn)品    30mg×5vials
67-97-0    Cholecalciferol (Vitamin D3)    維生素D3標(biāo)準(zhǔn)品    30mg×mpules
50-14-6    Ergocalciferol (Vitamin D2)    骨化醇標(biāo)準(zhǔn)品    30mg×mpules
67-96-9    Dihydrotachysterol    雙氫速甾醇標(biāo)準(zhǔn)品    30mg×4amplues
28910-89-6    Alprazolam Related Compound A    阿普唑侖相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
520-36-5    Apigenin    芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
578-74-5    Apigenin-7-glucoside    芹菜苷元-7-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
原代細(xì)胞

 

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