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上海莼試生物技術有限公司
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原代細胞傳代培育的辦法

時間:2018-3-5閱讀:111
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一、原理
原代細胞在培育瓶長成細密單層后,已基本上飽滿,為使細胞能持續生長,一起也將細胞數量擴展,就必須進行傳代(再培育)。
傳代培育也是一種將細胞種保存下去的辦法。一起也是使用培育細胞進行各種實驗的必經進程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才干分瓶。
二、材料和試劑
1、細胞:貼壁細胞株
2、試劑:0.25%胰酶、1640培育基(含10%小牛血清)
3、儀器和器材:倒置顯微鏡,培育箱、培育瓶、吸管、廢液缸等
三、操作過程
1、將長滿細胞的培育瓶中本來的培育液棄去。
2、參加0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下調查細胞。跟著時刻的推移,原貼壁的細胞逐步趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,參加10ml培育液停止消化。
調查消化也可以用肉眼,當見到瓶底發白并呈現細針孔空地時停止消化。一般室溫消化時刻約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培育液塞好橡皮塞,置37℃下持續培育。第二天調查貼壁生長情況。
附:消化液制造辦法:
原代細胞稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),參加100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。胰酶溶液中也可參加EDTA,使終究濃度達0.02%。
121-59-5    Carbarsone    卡巴胂標準品    200mg
121-57-3     Sulfanilic Acid     對氨基苯磺酸標準品    200mg
121412-77-9    Cefprozil (Z)-Isomer    頭孢丙烯(Z)-異構體標準品    200mg
121-33-5     Vanillin     香蘭素標準品    200mg
121-32-4    Ethyl Vanillin    乙基香蘭素標準品    200mg
121268-17-5    Alendronate Sodium    阿侖磷酸鈉標準品    200mg
121-25-5    Amprolium    安普羅銨標準品    200mg
12125-02-9    Ammonium Chloride    氯化銨標準品    200mg
121-19-7     Roxarsone     洛克沙砷標準品    200mg
121-00-6    3-tert-Butyl-4-hydroxyanisole    3-叔丁基-4-羥基茴香醚標準品    200mg
原代細胞

 

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