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海洋微生物菌種驟進(jìn)行操作

時間:2017/9/6閱讀:291
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海洋微生物菌種驟進(jìn)行操作:
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖毫呀赓N壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。
收集完蛋白樣品后,為確保每個蛋白樣品的上樣量一致,需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
(1)、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻(xiàn)資料進(jìn)行配制,也可以使用博研生物生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
(2)、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積,在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制,也可以使用我公司生產(chǎn)的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白。
(3)、上樣與電泳
冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果,以及判斷蛋白分子量大小,使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。
電泳時通常推薦在上層膠時使用低電壓恒壓電泳,而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置,低電壓可以設(shè)置在80-100V,高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見,也可以采用整個SDS-PAGE過程恒壓的方式,通常把電壓設(shè)置在100V,然后設(shè)定定時時間為90-120分鐘。設(shè)置定時可以避免經(jīng)常發(fā)生的電泳過頭。
通常電泳時溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳,或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況,預(yù)計(jì)目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。
海洋微生物菌種英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板因子4V1(PF4V1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Oryctolagus cuniculus (Rabbit)        血小板因子4(PF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板因子4(PF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Mus musculus (Mouse)        血小板因子4(PF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Rattus norvegicus (Rat)        血小板因子4(PF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Bos taurus; Bovine (Cattle)        血小板因子4(PF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Capra hircus; Caprine (Goat)        血小板因子4(PF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Sus scrofa; Porcine (Pig)        血小板因子4(PF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子受體樣蛋白(PDGFRL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Mus musculus (Mouse)        血小板衍生生長因子受體樣蛋白(PDGFRL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子受體β(PDGFRβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子受體α(PDGFRα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Rattus norvegicus (Rat)        血小板衍生生長因子受體α(PDGFRα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子D(PDGFD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子C(PDGFC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Mus musculus (Mouse)        血小板衍生生長因子C(PDGFC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子BB(PDGFBB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子B(PDGFB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Rattus norvegicus (Rat)        血小板衍生生長因子B(PDGFB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Sus scrofa; Porcine (Pig)        血小板衍生生長因子B(PDGFB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Mus musculus (Mouse)        血小板衍生生長因子B(PDGFB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子AB(PDGFAB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子AA(PDGFAA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Oryctolagus cuniculus (Rabbit)        血小板衍生生長因子A(PDGFA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板衍生生長因子A(PDGFA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Mus musculus (Mouse)        血小板衍生生長因子A(PDGFA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Rattus norvegicus (Rat)        血小板衍生生長因子A(PDGFA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T
英文名稱    Homo sapiens (Human)        血小板生成素(TPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)    規(guī)格:    48T/96T海洋微生物菌種

 

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