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elisa定量檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

時(shí)間:2017/11/6閱讀:252
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elisa定量檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
1. 100 ml 含重組表達(dá)質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后,離心5 000 g×5 min,棄上清,收獲菌體,用10 ml預(yù)冷的B/W緩沖液重懸。
2. 重懸液于冰上超聲處理,直至樣品不再粘稠,4℃離心 14 000 g×30 min,取上清液,0.45 μm膜抽濾后作為樣品液。
3. 將結(jié)合T7 Tag抗體的瓊脂充分懸起,平衡至室溫,裝入層析柱中。
4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱。
5. 10 ml B/W緩沖液過柱,洗去未結(jié)合蛋白。
6. 用5 ml洗脫緩沖液過柱,每次1 ml,洗脫液用含150 μl中和緩沖液的離心管收集,混勻后置于冰上,直接SDS-PAGE分析。
7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中,雙蒸水透析24 h,中間換液數(shù)次。
8. 用PEG 20000濃縮蛋白。
注意事項(xiàng)
蛋白在過層析柱前,要0.45 μm膜抽濾,否則幾次純化后,柱子中會(huì)有不溶物。
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