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其他類elisa定量檢測試劑盒試驗時的具體步驟

時間:2018/9/20閱讀:207
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其他類elisa定量檢測試劑盒試驗時的具體步驟
1(MMP-1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
    豬ELISA試劑盒試驗時的具體步驟如下:
    1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
    2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
    3、樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
    4、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
    5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
    6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

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