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滬鼎告訴您如何降低ELISA實驗背景問題

來源:上海滬鼎生物科技有限公司   2017年09月08日 10:00  

    ELISA實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時,我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結果的信噪比。
   

     背景噪音會影響您對結果的判斷,滬鼎告訴您如何降低ELISA實驗背景問題。
 

1.洗滌
    這一步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結合的材料殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數。

 

2.優化抗體濃度 
    如果試劑稍有不同,則可能需要優化抗體的量。非特異的抗體結合會增加背景,為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。

 

3.封閉到底有多關鍵
    封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。如果背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
   

    如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。

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