島津Lc-10AD液相色譜儀操作及維護保養(yǎng)規(guī)程

目的：建立Lc-10AD型液相色譜儀操作及維護保養(yǎng)規(guī)程，嚴格按規(guī)程操作，及時對液相色譜儀進行維護保養(yǎng)。

范圍：適用于Lc-10AD型液相色譜儀的操作及維護保養(yǎng)。

職責：QC檢驗員負責實施本規(guī)程，QC負責人監(jiān)督執(zhí)行。

內(nèi)容：

1.原理

液相色譜是用高壓*將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑，緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進樣閥注入供試品，由流動相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進入檢測器，色譜信號由積分儀記錄，得到的電信號-時間曲線。

2.系統(tǒng)適用性

按各品種項下要求對儀器進行適用性試驗，包括以下要求：

色譜柱的理論塔板數(shù)（N）：理論板數(shù)應高于各品種項下規(guī)定的小理論板數(shù)，若理論板數(shù)低于各品種項下規(guī)定的小理論板數(shù)，應改變色譜柱的某些條件（如柱長、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等）使理論板數(shù)達到要求。

分離度和拖尾因子：除另有規(guī)定外，分離度應大于1.5，T應在0.95～1.05之間。

3.儀器組成

本系統(tǒng)由Lc-10ADvp溶劑輸送泵、手動進樣閥7725i、SPD-10Avp紫外檢測器、浙大智達N2000色譜工作站和電腦等組成。

4.準備
4.1根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（箭頭一側朝上）。

4.2檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常

4.3流動相用到緩沖鹽時，先用10%甲醇水沖洗柱子60min，然后在換上緩沖鹽。

4.4準備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，用吸氣減壓裝置脫氣。

4.5按標準操作規(guī)程配制樣品和對照溶液，用合適的0.45μm濾膜過濾。

5.開機

接通電源，依次開啟泵，檢測器（在進樣前30min打開）、浙大智達N2000色譜工作站。

5.1 Lc-10AD泵操作

5.1.1逆時針轉動泵的排液閥45°，打開排液閥；

5.1.2按泵的[purge]鍵，pump指示燈亮，泵大約以8ml/min(可設定)的流速沖洗，3min（可設定）后自動停止；

5.1.3將排液閥順時針旋轉到底關閉排液閥。如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。如氣泡仍排不掉則用注射器抽流動相.

5.2參數(shù)設定

5.2.1 波長設定：在檢測器顯示初始屏幕時，用數(shù)字鍵輸入所需波長值，按[Enter]鍵確認，按[CE]鍵退出到初始屏幕，[back]鍵返回，[FUNC]鍵更換設定項目。

5.2.2 流速設定：在輸送泵顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速（柱在線時流速一般不超過1ml/min），按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出。

FLOW/PRESS      PRESSURE     P.MAX     P.MIN

       0.000            0            0          0

逐次按[func]鍵“FLOW/PRESS”項下“0.000”閃動時，輸入流量后按Enter。P.MAX，P.MIN閃動，輸入較高220和低0保護壓力后，按ENTER。

5.2.3 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應不超過1MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按5.1.3操作。

5.2.4 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時，可認為系統(tǒng)已達到平衡狀態(tài)，可以進樣。

5.3 浙大智達N2000色譜工作站設定

5.3.1打開電腦主機電源和屏幕顯示器。

5.3.2按《N2000色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程》打開“在線色譜工作站”軟件，輸入實驗信息并設定各項方法參數(shù)后，

 5.3.3選中需使用的通道，點擊OK，進入色譜工作站按下“數(shù)據(jù)收集”頁的[方法控制] 按鈕，選擇相對應的采集方法及保存路徑。

5.3.4 方法控制

5.3.4.1進入色譜工作站界面后點擊左上角方法.選擇檢測方法及數(shù)據(jù)保路徑.注意更改文件前綴名（即樣品的前綴名.一般為被檢測樣品首字母. ）

5.3.5.數(shù)據(jù)采集

5.3.5.1點擊查看基線，按檢測器ZERO鍵后，再點擊零點校正，待基線走穩(wěn)后，將進樣閥手柄置“LOAD”處，進樣，進樣后將進樣閥手柄轉到“INJECT”位置，點擊采集數(shù)據(jù)，工作站自動采集數(shù)據(jù)。

5.3.5 數(shù)據(jù)保存及處理數(shù)據(jù)

當樣品中所有組分峰都出現(xiàn)后，按“停止采集”按鈕，結束色譜信號文件的采集。進入離線工作找到相應的數(shù)據(jù)采集的保存路徑查看圖譜并處理數(shù)據(jù).

6.關機

先點擊停止查看基線然后用鼠標單擊右上角關閉對話框關閉系統(tǒng)，選擇關閉計算機，單擊是。關閉檢測器用純甲醇充分清洗泵和色譜柱，色譜柱的沖柱時間一般為1-1.5小時左右.

7.維護保養(yǎng)

7.1紫外檢測器應在進樣前30min打開，樣品分析完畢立即關閉。

7.2 檢測時方法用到高度梯度洗脫時，要先單次運行一次。待基線平穩(wěn)后方可進樣，流動相用到緩沖鹽時，要先用10%的甲醇水沖洗1h，才可換上緩沖鹽。

7.3樣品分析完畢，系統(tǒng)需用0.45µm濾膜過濾的純甲醇沖洗1-1.5h，并用注射器吸取純甲醇沖洗進樣器，流動相中含有鹽，要用10%甲醇水過渡沖洗1h，再用純甲醇沖洗系統(tǒng)。

7.4若發(fā)現(xiàn)空載系統(tǒng)壓力升高，可先下列步驟進行排除：

7.4.1將保護柱拆下，觀察柱壓是否正常，如果保護柱過濾芯片堵塞則予以更換。

7.4.2如更換保護柱過濾芯后仍不正常，再將色譜柱拆下，觀察不連接色譜柱時壓力。如仍然壓力很高，說明柱子沒有問題。

7.4.3 然后依次從色譜柱往進流動相的方向查找問題，拆掉單向閥上面的螺絲，觀察壓力變化，如果仍然有壓力，則說明單向閥可能有問題。將單向閥拆下，觀察壓力變化，如壓力正常，則將單向閥用甲醇超聲清洗30min，然后安裝再觀察壓力變化。

7.4.4 如問題仍然存在，可以考慮用5%稀硝酸水和純異丙醇清洗系統(tǒng)或者更換單向閥，中間一定要用超純水過渡，再用純甲醇清洗，接上色譜柱用甲醇再次清洗系統(tǒng)。注：（5%稀硝酸水溶液超聲時不要超過5min，因硝酸有腐蝕金屬作用）

7.5 檢測完樣品間隔3小時之內(nèi)可不用關閉檢測器，若超過3小時可先關閉檢測器，以減少氘燈能量的損耗。

7.6液相色譜儀四周應干燥清潔，切忌流動相或化學試劑濺到儀器上，產(chǎn)生腐蝕。

7.7每年校正一次，若產(chǎn)生異常情況或換氘燈，則必須再校正。

8.每次使用必須按要求填好儀器使用記錄及維護保養(yǎng)記錄。