RT-qPCR原理的三個主要步驟：

1、反轉錄：

·使用逆轉錄酶和特定引物將RNA樣品反轉錄成cDNA。

·該步驟將RNA模板轉化為更穩(wěn)定且可擴增的DNA形式。

·反轉錄過程中使用特定引物。

2、PCR擴增：

·使用特定引物對cDNA進行PCR擴增，這些引物環(huán)繞目標區(qū)域。

·PCR是一個循環(huán)過程，呈指數(shù)級擴增DNA模板的數(shù)量。

·PCR反應中包含熒光染料或探針，它們結合到擴增的DNA序列上并發(fā)出熒光信號。

3、熒光實時檢測：

·使用實時PCR儀器實時監(jiān)測熒光信號。

·熒光的數(shù)量與每個PCR循環(huán)中擴增的DNA數(shù)量成比例。

·使用專業(yè)軟件分析數(shù)據(jù)以確定循環(huán)閾值（Ct）值，該值表示熒光信號達到特定閾值水平所需的循環(huán)數(shù)。Ct值用于計算原始樣品中存在的目標DNA量，從而允許進行基因表達或病毒載量等定量分析。