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使用重組肽庫(kù)為受體識(shí)別新配體

時(shí)間:2012-12-15閱讀:182
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包含有億萬(wàn)個(gè)隨機(jī)肽段序列的大容量數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)多種蛋白靶分子是一個(gè)豐富的資源庫(kù),例如包含細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子配體、蛋白酶抑制劑和離子門通道。大多數(shù)情況下,肽段的配體通過(guò)將固定的純化后的蛋白在噬菌體展示文庫(kù)里掃描的方法純化。近有報(bào)道表明,甚至更復(fù)雜的靶分子,比如完整的細(xì)胞和組織也能夠通過(guò)特異性結(jié)合細(xì)胞表面抗原來(lái)鑒定肽段。通過(guò)線性和環(huán)形肽段文庫(kù)可以鑒定出10—20個(gè)氨基酸的高親和性配體。大多數(shù)這樣的序列和已知一些特定靶蛋白的配體沒(méi)有相似性。事實(shí)上這項(xiàng)技術(shù)和其他聯(lián)合方法都是基于相互作用的本質(zhì)的。

我們將描述一種多步鑒定受體的高親和性配體的方法。*步需要建立一個(gè)包含隨機(jī)肽段文庫(kù)的絲狀噬菌體pⅧ展示載體。然后文庫(kù)再在允許獨(dú)立相對(duì)較弱結(jié)合序列的條件下進(jìn)行掃描, 目的是為了篩選出一個(gè)或多個(gè)特異性結(jié)合靶蛋白的配體家族。然后可以通過(guò)親和性選擇展示系統(tǒng),建立包含有很多先導(dǎo)肽段序列的次級(jí)文庫(kù)。這時(shí)可以采取一系列寡核苷酸突變策略,在改變核苷酸的同時(shí)固定某些特定的核苷酸基團(tuán),或者在各個(gè)末端加上任意殘基作為受體添加接觸點(diǎn)的探針。然后文庫(kù)被運(yùn)用于擴(kuò)充展示高親和肽段克隆的選擇方法,后將獲得的克隆通過(guò)一種對(duì)親和力敏感的酶聯(lián)免疫吸收檢驗(yàn),即完成這個(gè)過(guò)程。

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