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酵母核糖核酸的提取時的操作方法

時間:2014/5/5閱讀:1314
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操作方法:
一、酵母RNA的提取 
(1)取酵母3克置于研缽中,加入25毫升0.5%氫氧化鈉溶液研成勻漿。 
(2)將勻漿移入三角瓶中,在沸水浴上加熱水30分鐘。 
(3)離心沉淀10-15分鐘。 
(4)取上清液用3M醋酸4-5滴酸化至蘭色石蕊試紙變紅色 
(5)一面攪拌一面加入含2%HCL的95%酒精溶液10毫升。 
(6)離心5分鐘,將沉淀用無水乙醇5毫升洗滌一次,離心5分鐘,沉淀再用3毫升洗滌一次,離心5 分鐘。 
(7)用手心握住 離心管 并不斷攪拌使揮發而使RNA迅速干燥。 
二、水解RNA 
取1/2左右的RNA粉末于試管中加入8%硫酸4毫升在沸水浴上水解5分鐘。 
三、組成成分鑒定 
(1)嘌呤堿基的檢查 
取水解液6滴,于試管中加氨水10滴,再加0.1M硝酸銀溶液6滴,在沸水浴上加熱,觀察變化,何故? 
(2)磷酸的檢查 
取水解液5滴,于試管中加5滴濃硝酸酸化,再加入5滴鉬酸銨溶液在沸水浴上加熱,冷卻靜止有何現象。 
(3)核糖的檢查 
取水解液6滴,于試管中加10%氫氧化鈉,使其成堿性,然后加地衣酚3毫升,在沸水浴上加熱,觀察變化,何故? 

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