ELISA預實驗通常預實驗包括全部標準曲線和小量樣本。預實驗有兩個主要目的，一來是熟悉實驗流程，發現可能忽略的問題；二來是測試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現不匹配的情況，不至于浪費過多樣本。另外是對樣品中目的分析物的豐度作一下大致了解，以確定合適稀釋度。

ELISA 樣本收集有講究:以血清為例，樣本收集可參考試劑盒說明書，但需注意以下要點。樣本盡量用無菌管收集，避免細菌的酶類和代謝產品對結果的影響。采集過程要避免溶血，因為紅細胞溶解釋放的活性物質可能會影響檢測。保存過程中如有沉淀，應離心后取上清液。樣本若不立即測定，建議按照每次使用量分裝保存在 -20℃，每次檢測使用一管，即避免交叉污染和反復凍融，有能保證檢測結果的平行可比性。

ELISA 實驗前要準備好相應試劑:提前將所有試劑平衡到室溫環境，這個過程大致需半小時左右。洗液是濃縮液，如有結晶析出，需*溶解后再進行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標準品溶液配制質量，蛋白標準品為凍干粉，重溶前需將管子離心，加入說明書的緩沖液，慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻，至少 15 分鐘，不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存，按每次使用量分裝后根據說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標準品時，建議用聚丙烯管（對蛋白吸附力很低），每步都要充分混勻且更換新槍頭，確保梯度準確性。

ELISA儀器設備的準備也*:相關設備包括移液器、洗板機/搖床和酶標儀。移液器的準確性對于ELISA實驗結果的可靠性十分關鍵，需要確保定期校準維護。搖床的使用是為了讓反應體系快速達到平衡，獲得穩定、可重復的結果。不用搖床對實驗通常的影響是，OD 值低，CV 大。酶標儀等設備使用前提前 15 分鐘開機預熱。