在流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)，各種熒光素標(biāo)記的抗體是必須的。那么熒光素該如何選擇呢，通常會參考以下5個(gè)方面：

1. 流式細(xì)胞儀配置：儀器需滿足激光管可激發(fā)相應(yīng)的熒光素且可同時(shí)檢測所需的熒光。附常見熒光素的激發(fā)波長和發(fā)射波長：

2. 染料的亮度與抗原表達(dá)量相匹配：低表達(dá)抗原，推薦使用亮熒光染料；高表達(dá)抗原，推薦使用弱熒光染料。

3. 熒光染料重疊最小化：盡量選擇光譜重疊小的熒光素，如FITC/PE-Cy7；選擇不同激光激發(fā)的熒光素，如FITC/APC，PE/APC。

光譜重疊嚴(yán)重的熒光素同時(shí)檢測會導(dǎo)致熒光溢漏，需調(diào)節(jié)補(bǔ)償。

4. 避免復(fù)合染料聯(lián)合使用帶來的假陽性：常見的復(fù)合染料有PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、APC-Cy7等，復(fù)合染料的信號衰退會降低APC或PE的靈敏度。如果出現(xiàn)信號衰退，則：

1）、 減少樣本暴露于光、高溫或固定劑；

2）、選擇染料時(shí)考慮：復(fù)合染料的信號衰退會降低APC或PE的靈敏度，避免染料和其衍生物在同一細(xì)胞上標(biāo)記。選擇更穩(wěn)定的tandem-dye（PerCp-Cy5.5）；

3）、 如果樣本需固定，選擇穩(wěn)定、可有效阻止復(fù)合染料信號衰退的固定劑多聚甲醛：冰上固定10min，離心除去多聚甲醛，將樣品重懸于PBS中。

5. 盡量使用紅色激光激發(fā)自發(fā)熒光高的樣本：每種細(xì)胞群都有不同水平的自發(fā)熒光。所有的熒光通道均可觀察到自發(fā)熒光，但自發(fā)熒光強(qiáng)度在波長較長時(shí)迅速降低。對自發(fā)熒光較強(qiáng)的細(xì)胞，選擇紅光激發(fā)，發(fā)射波長長的熒光素（如APC）可得到較好的S/N比值；對自發(fā)熒光比較弱的細(xì)胞，發(fā)射波長長的熒光素對S/N提高沒有明顯的改善，可選用FITC。