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ATCC細胞培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用

時間:2017/7/25閱讀:1180
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 ATCC細胞培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?
答:丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果
沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
倒置相差顯微鏡
倒置顯微鏡一般構造與普通顯微鏡一樣有物鏡目鏡光源光路系統(tǒng)等。但倒置顯微鏡的光源位于在載物臺上放,光線由上至下照射到觀察物上,物鏡則位于載物臺下方,觀察培養(yǎng)細胞多用放大倍數為 10×和 20×的物鏡,目鏡為 10×。
Ø 擦拭鏡頭可用沾酒精/乙混合液或二甲苯的鏡頭紙或脫脂棉。
Ø 擦拭涂漆表面,可用紗布除去灰塵。若有油漬污垢,用紗布沾少許汽油去除,不能用有機溶劑
(如:酒精乙和其它稀釋劑)擦拭涂漆表面和塑料部件。
Ø 儀器不使用時,用有機玻璃或聚乙烯罩上,并存放于干燥且沒有霉菌滋生的地方。
Ø 物鏡和目鏡放在有干燥劑的密閉容器中。
1、我把細胞從-80度的冰箱拿出來復蘇,期間沒有污染,放二氧化碳孵箱后*天在顯微鏡下看,發(fā)現很多漂浮的死細胞,貼壁的細胞很少,但培養(yǎng)液是清亮、桃紅色的,液面上可見漂浮著很多死細胞(我用的是DMEM+10%胎牛血清的培養(yǎng)液);我又把它放回孵箱;第二天看,和*天一樣,我就換液了;第三天看,鏡下基本未見什么細胞了。之前師兄給我說這種細胞長得慢(甲狀腺癌K1細胞),但是不至于不長,說明沒有復蘇成功。
可能的原因有:
a.   -80度凍存細胞的時間太長,一般如果需要長期保存的話,超過一個月。轉入液氮。
原有的凍存細胞狀態(tài)就不好,表現為細胞活力不夠,細胞密度不高。
換液太快,培養(yǎng)體系太大,如果ATCC細胞狀態(tài)不好,保持較小的培養(yǎng)容積,以獲得較高的細胞密度。如果培養(yǎng)基還是桃紅色,說明細胞的代謝活動很弱,此時不宜換液。不知道你這個細胞是喜歡聚集生長還是離散生長。根據條件調節(jié)。比如,如果喜歡聚堆長,建議先傾斜培養(yǎng)瓶/皿,2h為一個時間間隔,觀察細胞狀態(tài),以作調整。
b.  估計是細胞在凍存時消化過度,導致細胞狀態(tài)不好。
如果*天能見到貼壁的話,說明還是可以的.有時候培養(yǎng)基顏色偏紫,細胞貼壁會有問題的.你核實一下你培養(yǎng)基顏色是否偏堿.如果偏堿,可以適當調高培養(yǎng)箱二氧化碳的濃度.或者換新的培養(yǎng)基.特別是開啟過的培養(yǎng)基,適用時間長容易出現這個問題.
c.  我也遇到以上情況,根據經驗很多次像這樣的情況都是細胞凍存過程出了問題,另外復蘇細胞溶解要迅速,我們有時候水浴鍋刀38度,甚至40度,目的是讓其快速解凍,而且復蘇*次的培液血清濃度可以相對我高一點,等ATCC細胞第二次換液時換回10%。

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