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常規人正常組織細胞培養法

時間:2017/8/10閱讀:217
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1、人正常組織細胞初代消化培養法
(1)準備:取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
(2)布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。
(3)處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。
(4)剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結扎瓶口或塞以膠塞。
(5)消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
(6)分離:在消化過程中見消化液發混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500~1000轉/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養液。
(7)計數:用計數板計數,如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養液調整后,分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說,pH要求在7.2~7.4范圍,培養液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調整。
(8)培養:置于36.5℃溫箱培養,如用CO2溫箱培養,瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。
2、初代組織塊培養法
(1)剪切:把組織小塊置于小燒杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸靜Hanks液,用眼科剪反復剪切1mm3塊為止。
(2)擺布:用彎頭吸管吸取若干小塊,置于培養瓶中,用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養瓶底部,小塊相互距離以0.5cm為宜,每一25ml培養瓶底可擺布20~30塊。
(3)輕輕翻轉培養瓶,另瓶底向上,注意翻瓶時勿另組織小塊流動,塞好瓶塞,置36.5℃溫箱培養2小時左右(勿超過4小時),使小塊微干涸。
(4)培養:從微箱中取出培養瓶,開塞,46度斜持培養瓶,箱瓶底腳部輕輕注入培養液少許,然后人正常組織細胞緩緩再把培養瓶翻轉過來,讓培養液慢慢覆蓋附于瓶地上的組織小塊。置溫箱中靜止培養。待細胞從組織塊游出數量增多后。再補加培養液。
(R)-S-(2-氨基-2-羧乙基)-L-半胱氨酸    進口、國產    英文名稱:    L-Cystathionine    含量:    BR,90%
H-半胱氨酸-甘氨酸-OH    進口、國產    英文名稱:    Cys-Gly    含量:    BR,98%
聚賴氨酸    進口、國產    英文名稱:    ε-PL    含量:    BR,95%
α-糜蛋白酶    進口、國產    英文名稱:     α-Chymotrypsin(bovine)    含量:    USP級,1500USP u/mg
中溫淀粉酶    進口、國產    英文名稱:    糊精化酶    含量:    BR,4000u/g
高峰淀粉酶    進口、國產    英文名稱:    α-Amylase from Aspergillus oryzae    含量:    生物技術級,50u/mg
人正常組織細胞

 

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